MEK1和MEK2差异调节胰腺癌细胞功能实验与研究.pdfVIP

一、摘 由 英 二、英 三、论 刖 实验材料与方法………………………………………………………………12 实验结果(附论文图片)……………………………………………………2l 讨论……………………………………………………………………………25 结论……………………………………………………………………………26 四、本研究创新性自我评价………………………………………………………27 五、参考文献………………………………………………………………………28 六、附录 综j苤……………………………………………………………………………30 在学期间科研成绩……………………………………………………………41 致谢……………………………………………………………………………43 个人简历………………………………………………………………………44 ·中文论著摘要· MEKl和MEK2差异调节胰腺癌细胞功能的实验研究 鄹 昌 胰腺癌常伴随广泛的侵袭和／或转移，以至于无法进行根治性外科手术治疗。 开发以侵袭转移相关因子为靶点的新型分子靶向治疗方法为改善胰腺癌患者预后 提供了新的治疗手段。但目前胰腺癌侵袭转移的细胞及分子机制尚未完全阐明。 在前期研究中，利用BOP诱导的叙利亚仓鼠实验性胰腺癌模型，建立了非解 离型低转移株胰腺癌细胞系(PC．1)，再将PC．1细胞经皮下种植后，取转移癌建 立了解离型高转移株胰腺癌细胞系(PC．1．0)，而这两种同源细胞具有明显不同的 Difference mRNA表达存在明显差异，其中 Analysis。RDA)发现PC一1．0和PC．1 MEK2是与PC．1．0和PC．1细胞侵袭转移密切相关的因子之一。进一步研究中证 实MEK2参与调控胰腺癌细胞的侵袭转移过程。 kinase，MAPK)信 MEK2作为丝裂原活化蛋白激酶(mitogen-activatedprotein 号转导通路中的重要激酶分子，参与调控多种细胞生理学功能，包括细胞增殖、 分化，细胞分裂，应激和凋亡。而MAPK信号转导通路几乎存在于所有真核生物 bnaSe， 细胞中，为三级激酶体系：MAPK，丝裂原活化蛋白激酶激酶(MAP虹naSe kinasekinase， MKK或MEK)和丝裂原活化蛋白激酶激酶激酶(MAP虹naSe 者拥有85％相同的基因序列，通常被认为具有类似的生物学功能，但也有文献报 道二者可能通过不同途径调控细胞的生理功能。此外，在胰腺癌细胞侵袭转移中 MEKl和ME勉的作用机制尚未明确。 目 的 通过RNA干扰(RNA MEK2基因表达沉默，并建立相应稳定转染的PC．1．0亚细胞克隆，以进一步明确 MEKl和MEK2在胰腺癌细胞中对生物学功能差异调节及其分子机制。 材料与方法 一、材料 利用仓鼠解离型高转移株胰腺癌细胞(PC．1．0)，以RPMI．1640培养液培养， 并加10％胎牛血清、100U／ml青霉素G和100 37。C pg／ml链霉素，于含5％C02 孵箱内培养。上述细胞在进行免疫细胞学实验前无血清培养。 利用RNAi设计软件(Clontech MEK2基因序列设计shRNA序列。利用RNAi．Ready 粒构建MEKl和MEK2 MEKl和MEK2shRNA稳定转染的亚细胞克隆。利用荧光显微镜对细胞进行筛选。 Cruz 利用兔抗人MEKl、MEK2及13-actin多克隆抗体(SantaBiotechnology, Santa Cruz，CA)作