基于罗丹明B的人工核酸酶的合成和DNA切割活性研究.pdfVIP

基于罗丹明B的人工核酸酶的合成 及DNA切割活性研究 王金辉1，丁佩刚1，刘雅琪1，王敏1，叶勇H，赵玉芬1’2 1．郑州大学化学系河南省磷化学化工工程技术研究中心， 郑州450052； 2．清华大学化学系教育部生命有机磷＆化学生物学重点实验室，北京100084 化学合成的DNA、I矾A定位切割试剂是国际上80年代开始发展起来的一 类新型的非酶断裂工具，被称为人工核酸酶或化学核酸酶【1‘3】。人工核酸酶是分 子生物学及基因工程的重要工具，它可以作为研究核酸结构和功能方面的探针。 因此开发高效的人工核酸切割试剂，具有非常重要的理论意义和应用价值。为了 得到具有核酸切割功能的人工核酸酶，本课题组设计合成了一系列罗丹明B大 环多胺缀合物，目标化合物的结构经承、1HNMR、13CNMR和印oMS确认， 合成路线如下所示： 厂N 麓 Brl．HN掣 2．cvcIen 些 ————=——+ L／取r＼ 厂 L-阽-N9 k肛≮8 L1 Scheme routeof aIldL2． 1．Synthetic 通过琼脂糖凝胶电泳实验，研究结果表明生理条件下，L1与Co(II)形成配 合物对pUCl9质粒DNA具有较好的切割活性(Fig．1)，从缓冲体系及金属离 子的选择、pH值、配合物浓度、保温时间等几个方面，对配合物切割puCl9质 粒DNA的条件进行了优化。 国家自然科学基金资助．木通讯联系人，E-mail：Y星YQ卫g@圣墨丛：量幽：鱼n 45 1 08 墨。召嚣u甚≈．1 O．6 O．4 FrOmII 0．2 FrOmI l一暑；薯一^一装 0 7 6 5 4 3 2 1 1 2 3 4 5 6 7 0n ill E能ctofconce砷rationtlle of 19DNAwim a啊s-HClbu能r Fig．1 cleaVagepUC Ll-Co 37℃for48h．LaIle (pH=6．5)at 1，DNAcon仃0l；laIle2—7；O．05mM；0．1mM；0．15mM；0．2HlM； 0．25mM；0．3Ⅱn订． 参考文献 1． Y，ZhaoY．F；et War培L；Ye a1．Chem．J．Ctlinese．UniVerSities．2009，30(3)：493． 2． Z．Y．，XieR．G．，Yu