减毒鼠伤寒沙门氏菌运送CD8%2bT细胞表位的细胞免疫应答规律的研究.pdfVIP

其他论文 表明其特异性、重复性好，有望用’F临床样本的检测。 本试验首先选定了特异性很强的帕。，J，基因作为靶基因鉴定出0157及非0157大肠杆菌，同时进行毒力 相关基囚的扩增，以了解该菌株的毒力基囚的分布，从而在鉴定菌株的同时获得病原菌的分子致病因子特 征，对流行病学调查分析、制定预防和控制疾病暴发流行的对策有重要的参考价值。 参考文献略 减毒鼠伤寒沙门氏菌运送CD8+T细胞表位的细胞免疫应答规律研究 张辉“，焦新安1一，潘志明1，张晓明10 (1勘州大学人兽共患病与免疫学实验室， 2．农业部畜禽传染病学重点开放实验室，江苏扬州225009) 摘要：目的分析减毒沙门氏菌运送CD8+T细胞表位诱导机体产生特异性细胞免疫应答。方法通过构建 强趋势。结论减毒沙门氏菌可以有效运送CD8+T细胞表位并诱导产生特异细胞免疫应答，这为减毒细 菌作为运送载体的研究提供了参考依据。 关键词；减毒沙门氏菌、ELISPOT、细胞因子分泌细胞、Thl厂r112 近年来，在活疫苗载体研究中，沙门氏菌倍受关注。研究表明，它不但能刺激机体产生体液免疫应答， 同时还可激发细胞免疫应答．Darj等利用减毒鼠伤寒沙门氏菌作为疫苗载体免疫小鼠，成功地运送了两 (m的C片段．检测到特异性IgA抗体分泌细胞应答口l，因而该减毒细菌被视为理想的活疫苗载体之一， 但重组细菌激发机体产生免疫应答的机理还不尽清楚。尤其在诱导CD8+T细胞方面的戍答机制还待进一步 研究。 linked 酶联免疫斑点试验(Enzymeimmunospot (ASC)或分泌细胞因子(cK)细胞的一项细胞免疫学检测技术。因而可以通过间接对分泌细胞因子细胞的 检测来评价机体免疫系统的平衡。如ThltTh2平衡p】。由于该法灵敏度高，易操作，而且能够用于疫苗免 疫后细胞免疫类型及其水平的测定，是评价候选疫苗免疫效果的一种新方法，但国内仍使用不多“1。 卵清白蛋I刍(OVA)是研究细胞免疫应答的优良抗原，其CD8+T细胞表位已得到深入的研究；此外，淋巴 晓．因而本研究以OVA和LCMVNPCD8+T细胞表位为对象，构建表达它们的重组沙门氏菌，运用 ELISPOT法测定并分析了重组沙门氏菌所诱导的细胞免疫应答。 1104 第六次全国会员代表大会暨第11次学术研讨会 1材料和方法 1．1细菌和表位多肽 斯德研究所Leclerc教授惠赠。 5’ACCGCTCAGGCT里￡△生a￡△曼I!!丛工!Ⅱ鱼丛△△鱼￡匹A S I I N F E K L OVA257-264aa 5’CC鱼I△￡鱼!￡鱼至￡￡Q￡△△鱼￡!]蔓I鱼QI鱼!工坠￡丛Q鱼鱼I△△￡￡!Q V R R P Q A S G VY MG N L LCMVll8．132aa 1．2重组质拉的构建 用原核表达质粒pYA3334(KAN+)(DL NP CD8+T ptG2F)，以上质粒均由本室构建并保存。 1．3实验动物 6．8周龄C57BL／6小鼠(H．26)和BALB／c小鼠(H．2d)购自扬州大学比较医学中心。 1．4重组细菌的构建 ．70℃冻存备用。 1．5动物免疫 KAN的平板上划线培养，挑取单个菌落接种于含50pg／mlKAN的LB中 将重组菌在含有50pg／ml 组为生理盐水对照组，间隔2周，分别于第2次或第3次免疫后7天，取脾细胞进行ELISPOT试验。 1．6细胞制备 ． 无菌取小鼠脾脏，每只脾脏置于盛有5mlRPMI 1640中添加 1640(Sigma)完全培养液[CM：RPMI 2-巯基乙醇)的平皿中。用毛化载