考试植物的多倍体诱导及其观察实验方案.docVIP

陈香燕 201008030103 生科（1）班 植物多倍体的诱导及其鉴定 一、实验目的1、通过实验，掌握化学诱导植物多倍体的原理以及方法，学习利用秋水仙素诱 导植物多倍体的一般方法及多倍体诱导在植物育种上的意义。 2.学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点以及诱导染色体加倍后的细胞学表现，利用染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。 二、实验原理 生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目，这是物种的基本特征之一。多倍体是细胞中具有3个或3个以上的染色体组的生物体。在植物育种上，利用多倍体可以改良作物的经济性状，同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。 利用一些化学因素诱导植物产生多倍体，秋水仙素是诱导多倍体形成最有效和常用的药品之一，利用秋水仙素处理正在进行有丝分裂的细胞，可以抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体。因此在适宜浓度的秋水仙素作用下，它既可以有效的阻止纺锤体的形成，又不至于对细胞发生较大的毒害，因此，细胞经一定时期后仍可恢复正常，继续分裂，只是染色体数目加倍成为多倍性细胞，并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。将秋水仙素处理的植物根尖，制成临时装片，利用显微镜观察根尖分生区细胞中的染色体数目而确定是否形成染色体。 三、实验材料、器具及试剂 1、实验材料：蚕豆种子。 2、实验器具：显微镜、解剖针、小试管、刀片、载玻片、盖玻片、吸水纸等。 3、实验试剂：0.1%秋水仙素溶液，carnoy固定液，1mol/l盐酸，45%醋酸， 改良苯酚品红，70%酒精。 四、实验步骤 1、取材： 将蚕豆种子（2n=16）） 答：体细胞中含有三个或三个以上染色体组的整倍体为多倍体。 2.秋水仙素诱导植物染色体加倍的原理是什么？ 答：秋水仙素可以抑制纺锤丝的形成，使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制，有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体。 3、实验中为什么取2~3cm的根尖部分制作装片？ 答：因为在2~3cm的根尖部位，是细胞进行有丝分裂的分生区，制成装片易于实验观察。 4、为什么染色时间不能超过30min? 答：因为染色时间过长，细胞核会被染成深紫色，颜色太深不易观察到染色体的具体数目和形态。 五、实验结果 图1：用秋水仙素处理已发根至1~2cm的蚕豆种子48h之后，与未处理的蚕豆种子发根情况对照图。 实验组 对照组 图2：把用秋水仙素处理的发芽的蚕豆根尖制成临时装片，镜检如下图所示： 实验组的分生区40倍 对照组的分生区40倍 六、实验结果分析 一、从图1：用秋水仙素处理已发根至1~2cm的蚕豆种子48h之后，与未处理的蚕豆种子发根情况对照图中，可以明显的看到，用秋水仙素处理过的蚕豆种子根尖明显膨大变粗，而未处理过的蚕豆根尖则正常形态，并未加粗，相对较长而细。这是因为用秋水仙素处理蚕豆根尖之后，在细胞的分裂中期抑制纺锤体的形成，从而导致在有丝分裂后期，复制的染色体无法移向两级，细胞内的染色体加倍，形成多倍体，即具有多个染色体组，具有多套遗传物质，所以合成的蛋白质等营养物质更多，因此，细胞体积膨大，又因为秋水仙素进入细胞后，使细胞的渗透压增大，导致细胞大量吸水，细胞体积膨大。所以，综上两个原因，用秋水仙素处理的蚕豆根尖就膨大而粗，而对照组则无此变化。 二、图2：用秋水仙素处理的发芽的蚕豆根尖制成临时装片的镜检图中，可以明显的看到，用秋水仙素处理过的蚕豆根尖的分生区细胞的细胞体积、细胞核都比对照组的要大的多，实验组伸长区的细胞明显比对照组的细胞更长，细胞核大而明显，细胞质浓，这是因为秋水仙素处理根尖细胞之后，染色体加倍，形成多倍体，即具有多个染色体组，具有多套遗传物质，所以合成的蛋白质、糖类等营养物质更多，因此，细胞体积膨大，又因为秋水仙素进入细胞后，使细胞的渗透压增大，导致细胞大量吸水，细胞膨胀。最终导致细胞体积膨大，细胞核变大，质浓的结果。 同时，从细胞内染色体数目的变化来看，对照组中正常的蚕豆染色体共有12条(2n=12),在图2中，经过用秋水仙素处理以后，可以明显的看到大量的细胞中的染色体数目加倍，即具有3个或3个以上的染色体组，因此，说明蚕豆根尖经过秋水仙素处理之后，成功的形成了多倍体。另外，从制片中染色体的形态来看，图2中的染色体制片质量是比较好的，因为在一张染色体制片中，可以明显的观察到较多的中期分裂相，染色体分散而不重叠；染色体不扭曲，不断裂，主缢痕，随体都比较清晰；且制片基本上为一层平展的细胞， 视野内的细胞都在一个平面上；染色