犬瘟热减毒疫苗对小熊猫安全性和免疫原性研究(P1252-1255).pdfVIP

中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 犬瘟热减毒疫苗对小熊猫安全性与免疫原性研究 闫 芳13， 夏成柱。，李德生2，王鹏彦2，高风山‘，高玉伟。，黄耕。 学院，山西太谷030008) 犬瘟热病毒(canine distemper 种急性、高度接触性传染病，其主要引起犬科、鼬科和浣熊科动物犬瘟热(CD)的发生，但是伴随生态环 境的变化和犬瘟热病毒对动物流行病因素的适应，它的自然感染宿主范围在不断扩大，危害也越来越大。 大熊猫(Afluropoda 防是必要的。小熊猫作为浣熊科的动物，对CDV非常敏感，本研究通过犬瘟热减毒疫苗对小熊猫安全性 与免疫原性研究探讨小熊猫作为评价犬瘟热弱毒疫苗对大熊猫的安全性与免疫原性动物模型的可能性。 察免疫小熊猫的精神、食欲、体温、粪便的变化、是否咳嗽和是否有神经症状，并于免疫前、免疫后一 濒死扑杀，主要剖检变化为小叶性肺炎病变，电镜负染标本中见有犬瘟热病毒样颗粒。应用CDVH蛋白 基因特异性诊断引物P3一P4、P5一P6对肝脏样品进行RT--PCR，结果扩增出了CDVH蛋白基因相应核 CDV。 产生中和抗体的重要抗原，在病毒免疫中占有重要的地位。F蛋白介导病毒与感染细胞、感染细胞与非 结合的蛋白，其抗原变化最高，基因变异性最大，因此，该蛋白是研究病毒基因变异最合适的蛋白，国 CDV H蛋自基因分段RT—PCR扩增和测序，扩增片段大小分别为1064bp和ll19bp。然后将所测得 H蛋白基因进行系统发生分析， 全基因序列，H蛋自基因全长为1946bp。用DNAsis软件对8株CDV CDVH蛋白基因从系统发生上可分为两大谱系，这两大谱系之间存在91．9％的同源性，其中一大谱系 H蛋白基因和 中国畜牧兽医学会家畜传染病学分会成立20周年庆典暨第十次学术研讨会论文集 代鸡胚传代后的致弱株。小熊猫免疫所用的弱毒疫苗株是本室于1997年复壮的弱毒疫苗株，临床应用 多年来取得很好的效果。这次从小熊猫肝脏病料所扩增的CDV 株构成，主要包括近年来本室从我国犬、吉林小熊猫和中国大熊猫感染CDV的体内分离到的CDV毒株 H蛋白基因同源性只有91．9％，CDVH蛋白基因推导的CDVH蛋白氨基酸序 脏病料所扩增的CDV 607个氨基酸。CDVH蛋白基因潜在的糖基化位点最多可达9个，其中4个潜在的糖基化位点，位于 19—2I、149—151、422—424和587—589位氨基酸，8株CDV 氨基酸所形成的潜在糖基化位点仅野毒株所具有，这次从小熊猫肝脏病料所扩增的H蛋自基因及小熊猫 一样在309—311位的氨基酸不存在潜在的糖基化位点，N一联结糖基化位点的不同可能影响H蛋白抗原 性。另外，CDVH蛋白系统发生分析看出这次从小熊猫肝脏病料中所扩的CDVH蛋白基因及小熊猫免 疫所用的弱毒疫苗株CDVH蛋白基因与弱毒疫苗株同源性为95．6％，而与强毒株的同源性为91．O％， 由此看来，引起该研究中心小熊猫发病死亡的CDV并非是CDV强毒而是由疫苗弱毒引起 采用固定病毒一稀释血清方法对16只小熊猫免疫前、免疫后一个月、两个月及4个月血清进行了CDV 非特异性病毒抑制成分，随后将血清样品中加入终浓度为0．025％恩诺沙星，10000 照，阴阳性血清对照，病毒对照及正常细胞对照。4d判定结果，以每孔完全不出现蜘蛛样的融合性细胞 清的中和抗体效价。小熊猫血清犬瘟热中和抗体测定结果见表1，从表中可以看出小熊猫在免疫注射前血 清犬瘟热中和抗体效价均在l：4以下，免疫后一个月其血清中和抗体效价均在1：128以上，从其诱导的 血清中和抗体消长情况来看，免疫后2—4个月其中和抗体效价开始下降，为此有必要改变只进行一次免 疫的免疫程序。 表1小熊猫血清犬瘟热中和抗体检测结果 I Serum titers CDVoftheAilurusesvaccinedwith Figure neutralizingantibodyagainst