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实验八 环境因素对微生物生长的影响 1.1 掌握滤纸片法和试管二倍稀释法两种实验方法。 1.2 了解化学因素、生物因素对微生物生长的影响。 1 实验目的 2.1 为什么有机溶剂（酚、醇、醛等）、重金属、卤素化合物、表面活性剂能影响微生物生长? 2.2 抗生素、中草药影响微生物生物的机理有哪些? 2 实验原理(通过了解下列问题来掌握 98实验原理) 3 材料与方法 3.1.1 培养基：LB培养基（液体、固体）。 3.1.2 仪器：恒温培养箱。 3.1.3 菌种： E.coli, S. aureus, P. aeruginosa, salmonella typhimurium 4 其它物品：滤纸片，镊子，无菌玻璃涂棒，2%碘液、1%来苏尔、5%石炭酸，青霉素溶液，显齿蛇葡萄提取物等。 。 3.1 实验器材 3.2 方法（A 滤纸片法测定抑菌圈直径） 3.2.1 菌悬液制备。将菌株活化后，挑取单菌落与无菌生理盐水 混合，并用生理盐水调至0.5 McFarland单位，即为1-2×108 CFU/mL的菌悬液浓度。 3.2.2 接种。按无菌操作取0.1 mL浓度菌悬液加入各， 用玻璃涂棒将菌液均匀涂布于平板上。 3.2.3 标记。按培养皿大小确定放置药敏纸片的位置，并标明抑 菌剂的名称。 3.2.5 培养。静置15 min，放入37 ℃培养箱中倒置培养24 h 。 3.2.6 观察记录结果。用尺子测量抑菌圈直径，单位mm。 3.2.4 贴药敏纸片。用镊子取一片滤纸片浸入抑菌物液体约 2－3s,在瓶口沥去多余的水分，置于含菌平板标记的相应位置。 3.2 方法（B 试管二倍稀释法测量MIC） 3.2.1 抑菌物质的稀释。首先在8支试管中各加入1 mL LB液体培 养基，然后在第1支试管中加入1 mL 的抑菌物质，混匀后吸取 1 mL 放入第2支试管中，依此类推，稀释至第8支试管 ，制备出 倍比系列稀释的抑菌物质试管。 3.2.2 接种、培养。按无菌操作取0.1 mL菌悬液加入各试管培养 基中，将培养体系置37 ℃培养箱中培养24h。 3.2.3 观察、记录。按浓度高低观察每支试管，找出微生物不生 长的最低浓度抑菌物质试管号，计算MIC. 实验报告 1 用文字描述实验项目、实验目的、材料与方法。 2 实验结果。设计表格，将同组4人测定的抑菌圈直径填入表中。记各管微生物生长的情况。 实验分析。根据实验结果判断抑菌物质对G+和G－菌的抑制情况，对临床治疗的意义。分析实验操作中存在什么问题，应如何改进？