端聚酶在肿瘤及延缓衰老研究中的应用和局限性.pdfVIP

端橐酶在肿瘤厦廷缓衰老研究中的应用与局限性 41 端聚酶在肿瘤及延缓衰老研究中的应用与局限性 童坦君 张晓伟 张宗玉 肿瘤形成与细胞生长失控有关，这是知之已久的事实。现在发现它还与细胞凋亡及细胞 衰老有关。端聚酶与细胞生长、细胞凋亡及细胞衰老三者有密切关系，它在肿瘤诊治、延缓衰 老研究中占有重要地位。现将其研究进展简介如下。 染色体端区(telomere)又称端粒。端区消失可能是人类细胞丧失复制能力的原因之一。 端区是真核生物染色体末端的特殊结构。人类染色体末端普遍存在端区结构，但各类细胞端 区长度各有差异，一般体细胞的端区比生殖细胞短，人类染色体端区由进化上高度保守的 成的核蛋白，是一种逆转录酶。端聚酶的存在使染色体末端得以完全复制。它可以以自身 RNA为模板逆转录合成端区重复序列。端区可保护染色体，防止染色体降解或端间融合，并 与细胞周期有关…。人类体细胞的端区随年龄增高而缩短，导致染色体稳定性下降，肿瘤发 病率增高。 端聚酶是近年国际医学界研究的热点，除生殖细胞与造血干细胞外的正常细胞几乎无此 rneric repeatamplication 以上的细胞具有端聚酶活性。具有端聚酶活性的肿瘤细胞端区长度恒定，不随细胞分裂而缩 短．恶性度高，可见端聚酶在维持端区长度及肿瘤的恶性度方面起着重要作用。目前，人类端 J。由于绝大多数肿瘤细胞都具 使端聚酶的研究突飞猛进，为肿瘤的基因治疗开辟了新途径L4 有端聚酶活性。因此，以抑制端聚酶活性为手段的基因疗法，对肿瘤有很强的广谱性及靶向 性，以致不少学者设想，不久可将端聚酶抑制剂列人抗肿瘤新药。但与肿瘤治疗的绝大多数策 略相似，利用端聚酶的此种策略必然也有其自身的弱点，因而在给予期望的同时，有必要了解 其局限性。 抑制端聚酶活性能否彻底抑制肿瘤 人类体细胞(造血干细胞除外)端聚酶活性极低。妊娠16周，大多数人胚组织的端聚酶即 呈抑制状态。统计资料表明，85％以上的原发性肿瘤有端聚酶活性，人类多种肿瘤细胞系亦有 较强的端聚酶活性㈣。端聚酶活性与肿瘤大小、淋巴结转移、肿瘤分级和预后密切相关[6·…。 其活性可用TRAP法，即用聚合酶链反应(PCR)技术扩增反应产物，然后辅以银染法测定。 将正常细胞与人的肿瘤细胞融合，即可阻抑肿瘤细胞中的端聚酶。如在融合前将肿瘤细胞的 作者单位：100083北京医科大学生物化学与分子生物学系 中国癌症研究进展@ 基以抑制端聚酶，可诱导肿瘤细胞的分化与凋亡L8J。 自发现端聚酶活性与人类肿瘤密切相关后，国际上大力开展抑制端聚酶括性的研究．包括 利用端聚酶抑制剂、反义RNA及其衍生物等策略，试图以此抑制肿瘤，已取得了部分效果。 我们用此策略，降低了肿瘤细胞的恶性度，部分逆转了其恶性表型。 我们构建了转导效率高、整合稳定、能高效表达外源基因的整合型腺病毒新型载体 核苷酸之问，模板区为5 293细胞，经病毒滴度测定，获得反义重组腺病毒。将该病毒感染人乳腺癌细胞MCF-7。经 微镜下可见，细胞体积变大，胞体细长，胞浆颗粒较多，分裂相减少；而对照细胞(空载体病毒感 清亮，分裂相多见，仍为典型的肿瘤细胞。 ， 我们分别以neo与hTR cDNA为探针，用Southernblot鉴定病毒在感染细胞中的整合功 能，两种方法都证明该反义hTR 粒酶活性，发现感染细胞的端粒酶活性明显降低，以(TrAGGG)4为探针，用核酸杂交技术测 定端区长度。结果表明，反义hTR重组病毒感染使MCF-7的端区长度显著缩短(表1)。 对照组高一倍。细胞生长曲线显示，在重组病毒感染初期，其生长速率无明显变化；但在感染 并传代15代后，生长速度逐渐降低，生长抑制率达60％。流式细胞计分析(表2)表明，其G 病毒感染后，MCF-7细胞的裸鼠致瘤时间延后，软琼脂集落形成能力(表3)与裸鼠致瘤能力 (表4)皆明显减弱。 ’ 袁1反义ll豫重组病毒感染对乳腺癌细胞MCF-7端区长度的