低氧诱导因子1α（HIF-1α）在喉鳞癌中的表达及其临床意义的的研究.pdfVIP

中文摘要 低氧诱导因子1n(HIF—la)在喉鳞癌中的表达 及其临床意义的研究 摘 要 目的：缺氧是人类和动物实体肿瘤的一个共同特征。低氧诱导因子l induciblefactor1O【，HIF一1Ⅱ1是机体在低氧条件下产生的一转录 a(hypoxia 活化因子，它能指导多种低氧反应基因的转录，为机体适应低氧，维持内 环境稳态的一个重要因素。当周围环境的氧浓度下降时，HIF—la表达增 加，并且其表达增加表现在多个水平上，包括转录和蛋白等水平，但主要 是蛋白水平明显增多。HIF一1et是HIF一1的一个亚基，是唯一的氧调节亚 单位，HIF．1ct的活性是HIF—l的决定性成分，其活性对维持肿瘤细胞的 能量代谢、新生血管形成以及促进肿瘤的增殖生长、侵袭和转移起着重要 作用，并受多种因子的调控和影响。在多利-恶性肿瘤中都存在HIF—Ia蛋 白的过表达，并与预后不良密切相关。HIF一1et与肿瘤的关系已成为近年 来肿瘤学研究中的一个新的热点。有关HIF—let与喉鳞癌发生发展关系的 研究，目前国内尚未见报道。本实验首先从人喉鳞癌实体瘤入手，应用免 疫组织化学技术了解缺氧诱导因子let(HIF．1et)极其相关调控因子与喉 鳞癌生物学行为的关系；进而通过体外细胞培养，从分子水平探讨低氧条 件下，缺氧诱导因子10L(HIF—la)及其相关调控因子在头颈肿瘤中的表 达及相互作用机制，进一步明确HIF。1et与化疗抵抗的关系：在此基础上 进行靶向HIF．1et活性及表达的实验，深入探讨以缺氧为靶点对治疗头颈 肿瘤及化疗增敏的潜在临床价值。 方法： 1HIF—let在喉鳞癌中的表达及其与喉鳞癌生物学行为的关系。标本选 经治疗的喉声门上型癌、喉咽癌病人63例标本，其中男59例，女4例； 定TNM分期。喉癌分型：喉声门上型癌42例，喉咽癌2l例；临床分期： 15例，鳞癌II级29例、鳞癌III级19例；病理证实颈部淋巴结转移组41 中文摘要 例，无转移组22例。取癌旁正常粘膜组织20例作为对照。所有标本均一 部分迅速置于液氮罐中保存，一部分标本离体后2小时内放入10％中性福 尔马林中固定24小时，石蜡包埋，常规病理HE染色，所有标本均经两 位副高以上职称的病理科医生确定病理性质和病理学分级。肿瘤组织均病 理证实为鳞状细胞癌，喉癌旁正常粘膜病理为正常喉组织。 1．1免疫组织化学染色方法对喉鳞癌63例标本进行检测，其中病理 证实颈部淋巴结转移组41例，无转移组22例。取癌旁正常粘膜组织20 倍光镜下随意选取10个视野，计数每个视野中100个肿瘤细胞中的阳性 细胞数，取其平均数求其阳性百分率作为结果。平均阳性细胞所占比例 s5％判定为阴性，阳性染色细胞5％判定为阳性。 1．2流式细胞仪对转移组患者的原发灶、淋巴结转移灶以及非转移组 (409m厚)，网搓法制备单细胞样品。在对蛋白免疫荧光标记物测定时，设 Coulter公司生产 一抗或二抗的本底对照和阴性对照。采用美国Beckman 地Epics。XLII型流式细胞仪进行检测。以荧光指数(FI)表示蛋白表达产 物的相对含量，FI=(瘤细胞表达的平均荧光强度／正常对照样品平均荧光强 度)。荧光指数(FI)可相对客观的反映蛋白的表达程度。 1．3用Trizol 提取的总RNA进行RT-PCR反应，扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳，电泳 结果在紫外凝胶投射分析系统中照相分析，分别比较HIF一1amRNA在喉 鳞癌组织和癌旁正常粘膜组织中的表达水平，分析其基因表达调控水平。 HIF—la及其相关基因表达的影响：人 2低氧对喉鳞癌细胞系Hep．2 h组及对照组。缺氧 h组、缺氧24 喉鳞癌细胞Hep一2分成3组：缺氧12 h和24