线粒体功能障碍对豚鼠耳蜗AQP-1表达和运输影响.pdf

中文摘要 线粒体功能障碍对豚鼠耳蜗AQP．1表达和运输 的影响 摘 要 目的：建立一个线粒体功能障碍诱导的突发性感音神 onsetsensorineural 经性耳聋(Sudden loss，SSNHL) hearing 的表达与运输的影响。 方法：62只白色雄性豚鼠分成2批，第一批49只用 于建立SSNHL动物模型，第二批13只用于测试ATP缺 乏对AQP．1表达与运输的影响。用3一硝基丙酸 (3-nitropropionicacid，3-NP)耳蜗局部投放诱导线粒体功 能障碍。第一批豚鼠根据给药浓度和测试听性脑于反应 brainstem (auditory mol／L 组，即高剂量(0．5 3-NP)组6小时组，高剂量l天组， mol／L 高剂量3天组，低剂量组(O．3 3-NP)1天组，低剂量 buffered saline，PBS) 3天组和磷酸盐缓冲液(phosphate 对照组4小时组和1天组。第二批豚鼠分成3组，即O．5 mol／L 3-NP4小时组，3天组和PBS对照组。在手术显微 mol／L， 镜下耳后入路暴露听泡，找到圆窗龛，用浸有0．5 0．3mol／L 3-NP或PBS的明胶海绵分别放置于豚鼠左耳圆 窗龛作用30分钟后取出。破坏对侧耳蜗，在各组动物规 定的时间点测定ABR，于手术后2小时动物清醒后观测 前庭失衡症状用数码摄像机记录动物桶状翻滚和自发性 中文摘要 眼震。在全麻状态下，第一批动物用4％多聚甲醛加1％ 戊二醛行活体心脏灌注固定，第二批动物用4％多聚甲醛 行活体心脏灌注固定。用同样的固定液过夜后，上述标本 经10％乙二胺四乙酸二钠(disodium ethylenediamine tetraacetic 物耳蜗行JB4包埋、切片、甲苯胺兰染色后用光镜观察各 组形态学差异。第二批动物耳蜗石蜡包埋、切片后用免疫 萤光染色，激光共聚焦显微镜(confocalmicroscope)观察 J测量耳蜗各圈侧壁 AQP，1表达与亚细胞分布，用image 纤维细胞AQP一1荧光的平均灰度值。+ 结果：第一批动物给药后动物听力丧失比率为：高剂 量组、高剂量4小时组、高剂量1天组、高剂量3天组、 高剂量7天组，低剂量组和对照组(4小时组和I天组) 给药前后听力变化的差别有显著性(p0．01)。给药后前庭 症状发生率：高剂量组快相指向健侧的自发性眼震发生 率为100％，低剂量组快相指向健侧的自发性眼震发生率 为20％(1／5)。高剂量组的动物出现包括指向术侧的桶状 翻滚在内的严重步态障碍的发生率为68％(23／34)和低剂 量组动物的严重步态障碍的发生率为20％(1／s)。仅有头 部倾斜症状的轻度步态障碍动物在高剂量组为32％ (11／34)，低剂量组为20％(1／5)。上述前庭症状均在2天内 消失。高剂量组(6小时，l天，3天和7天)，低剂量组(1 中文摘要 天和3天)和对照组(4小时和l天)前庭症状发生率有差别。 形态学发现：第一批所有PBS对照组和3-NP实验组的动 胞，内沟细胞明显水肿；7天后上述水肿消退。高剂量组 动物在给药12小时内螺旋神经节细胞胞核和胞浆中有空 泡形成，并且髓鞘和胞体间的间隙增大；7天后，上述空