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牛乳中酪蛋白的制备.ppt
* ? 实验七 牛乳中酪蛋白的制备 目的要求 学习从牛乳中分离纯化酪蛋白的原理和方法。 ? ?实验原理 牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,含量约为35g/L。酪蛋白是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为4.7。利用等电点时溶解度最低的原理,将牛乳的pH调至4.7时,酪蛋白就沉淀出来。用乙醇洗涤沉淀物,乙醚除去脂类杂质后便可得到纯的酪蛋白。 试剂和器材 试剂: 95%乙醇;乙醇—乙醚混合液 (V/V=1∶1);无水乙醚 0.2mol/L pH4.7醋酸—醋酸钠缓冲液 材料 纯牛奶(蒙牛) 1.将25mL牛奶加热至40℃。在搅拌下慢慢加入预热至40℃、pH4.7醋酸缓冲液25mL。用精密试纸调pH值至4.7。 2. 将上述悬浮液冷却至室温。离心10min(3000r/min)弃去上清液,得酪蛋白粗制品。 3.用水洗沉淀两次,离心5min(3000r/min),弃去上清液。 操作方法 3.用乙醇洗沉淀1次,离心5min(3000r/min),弃去上清 液。用乙醇—乙醚混合液洗沉淀1次。最后用乙醚洗沉淀1次, 各离心5min(3000r/min) 。 4.将沉淀摊开在表面皿上,风干;得酪蛋白纯品。 5.准确称重,计算含量酪蛋白g/100mL牛乳(g%),并和 理论含量为3.5g/100mL牛乳相比较,求出实际得率。 *
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