实验2 叶绿体分离、离体叶绿体的还原活性.docVIP

实验五 叶绿体的分离、离体叶绿体的还原活性 一、实验目的 制备具有活性的离体叶绿体和测定希尔反应活力是研究叶绿体结构功能和光合作用机理的重要技术条件。本实验通过学习分离制备叶绿体的技术方法，加深对希尔反应的理解及对光反应的认识。 PSⅡ和PSⅠ经过两种连续光化学反应驱动的，PSⅡ的一个重要功能是利用光能使水裂解放氧。 2H2O 光子 O2 + 4H+ + 4e- 英国生物化学家Hill（1937）首先将离体叶绿体加入有适当氢受体（如草酸高铁钾盐，2,6-二氯酚靛酚，NAD+和NADP+）的水溶液中，照光后即有O2放出，这就是水的光解，即希尔反应。 叶绿体的分离采用离心分级分离，即利用叶绿体的直径和沉降系数与其他细胞器不同的特点，先用低速离心除去细胞碎片，后用高速离心沉降叶绿体。希尔反应活力的测定是将叶绿体加入，并照光，水被光解放氧测定。 新鲜菠菜叶片。 四、设备与试剂 分光光度计，离心机，照光装置（2 只500W 钨灯作为光源），试管，移液管，烧杯，纱布，研钵等。 0.35MNaCl溶液、0.01MTris溶液 五、实验步骤 1、离体叶绿体的制备： 1ml Tris缓冲液、石英砂，研磨。 匀浆用脱脂棉过滤。 1000转/分离心5分钟，取上清液，3000转/分离心5分钟。 去除上清液，保留沉淀。 在沉淀中加入5ml 0.35M NaCl，搅匀，得到叶绿体悬浮液。 2、