5-NO-%2c2--PAH光度法测定血清白蛋白的研究.pdfVIP

广西师范大学学报(自然科学版) 2003年10月 V01．21No2 JOURNALOFGUANGXINORMAI．UNIVERSITY 5一NO。一PAH光度法测定血清白蛋白的研究 张小玲，李春迎，贾宏瑛 陕西师范大学化学与材料科学学院．陕西西安710062) 血清中蛋白的测定在临床医学、生命科学的研究中都有着重要的意义．由于大多数蛋白质在可见区无 蛋白测定，结果满意． 1实验部分 1．1 仪器和试剂 uV1 白蛋白标准溶液：相对分子质量以65000计，配制成220 法另文报告)，配制成1×10 水为二次去离子水． 1．2实验方法于10mL比色管中依次加入1．0mI。B—R缓冲、0．4 液及一定量的BSA标准溶液，用水稀释至刻度，摇匀． 室温放置20min后，在532nrll处，用1cm比色皿以 水为参比分别测量试剂空白和络合物溶液的吸光度， 以△A—A试m—A镕☆自进行定量． 2结果讨论 2．I 吸收光谱 5 NO：一PAH及其与BSA形成的络 合物的吸收光谱如图1所示．由图可见，试剂最大吸收 为527nm，络合物最大吸收为532nm，吸收峰位移很 图1吸收光谱 小．但BSA的加入使试剂5-NO。一PAH的吸光度降低， l 5。N0 5一NO 2一PAH；2 2。PAH‘BSAtpH一0· 且降低值△“与BSA浓度成线性．本文选择在532tim 伸一4×10～tool／L，C／t％A一3×10 tool／I．．永参比 处进行凸以测定 2 2反应条件的确定 实验考察了酸度和反应时间，表明5 5 内，室温下1 rain显色完全，至少可稳定存在18 色20rain． xaoline．com． E—mail：wnf@pub 广西师范大学学报(自然科学版) 第21卷 34正交表，分别考察了缓冲剂用量、指示剂用量、试剂加入顺序和温度的影响(见 实验进一步使用L9 m1．时吸光度大且稳定；试剂加入顺 表1)．表明，缓冲剂用量对吸光度没有影响；指示剂用量在0．4～o．8 序为显色剂R、缓冲剂、BSA时吸光度较大；温度降低有利于反应进行．综合各方面因素选定实验条件为： 1mI。缓冲剂，0．4mI。指示剂，试剂加入顺序为R、缓冲剂、BSA，在室温下测定吸光度值 Table1 thelevelof condition experimental 2．3影响吸光度的因素实验考察了有机溶剂、表面活性剂、离子强度对吸光度的影响，表明乙醇和丙酮 的加入对吸光度均无影响．阴、阳离子表面活性剂对体系均有影响，表现为负干扰，非离子表面活性剂无显 mol／I，范围内，对体系的吸光度无显著影响． 著影响．NaCI浓度在O～0．02 2+(8 mg／I。)，Fe rag／ Gly，Cys，Val，Asp最小允许量均高于350mg／1．；金属离子允许量分别为Cu”(O．5 I．)，Ca”(24 mg／I，)，Mg”(240mg／I，) 2．4络合物的最大结合