208份丙肝患者动态血清与丙型肝炎病毒高变区1N端模拟表位反应研究.pdfVIP

·舶· 208份丙肝患者动态血清与丙型肝炎病毒高变区1N端模拟表位反应研究 李靖陈昊董漪高蓉舒翠莉赵军程云 丙型肝炎病毒(H(Ⅳ)包膜蛋白2N端的高变区1 (mrRl)是目前唯一被公认存在HCV中和表位的区域，对于 HVRl中抗原表位的研究一直是HI：V研究的—个重点。Z舡性质被分为以下4组：极性氨基酸(Q，N，S，T)，酸性氨基酸 err等人的研究表明HVRlC端存在着两个相互重叠且与 (D，E)，碱性氨基酸(K，R，H)，以及非极性氨基酸(G，P，C， M。A，V，L，I，F，Y，W)，同组中的各氨基酸在氨基酸序列分析 HCV患者血清交叉反应范围较广的优势表位，但是HCV患 中被认为具有相似的性质。反之则否。 者血清与HVRlN端表位的反应频率却较低。本室对HVRl 区模拟表位的研究中，从设计的众多模拟表位中筛选出一个 。4．统计学分析：采用STATAS统计软件。 活性最好的7肽(384aⅥYrSG391)。本研究进一步观察 表1 35位HCV患者基本资料 了其与308份HCv患者动态血清的反应特点，并对HCv患 者血清中抗7肽抗体水平与患者病程间的关系进行了初步探 讨。 材料与方法： 1．血清来源及分组： 208份抗HCV患者动态血清取自302医院血清库，来自 35位1998—2003年302医院H口，住院患者，PCR检测血清 HCV RNA90％为阳性。患者年龄跨度32～82岁。主要集中 在50岁以上的中老年。男女比例11：24。血清时间跨度2 月--24月不等。将308份血清按2000年西安第十次全国病 毒性肝炎会议修订的诊断标准分为轻度慢肝，中度慢肝，重度 慢肝，活动性肝硬化。静止性肝硬化。正常对照血清：共90 份，取自解放军总医院输血科健康献血人员，化验检查各项指 标均正常。 2．HCV患者血清中抗7肽抗体检测采用酶联免疫吸附 试验： (1)分别用上述合成肽作为抗原包被聚丙乙烯微孔条，合 成肽的包被浓度为lmg／ml，以100止吼包被，4C过夜。(2) 10％FCS．FBS封闭未被合成肽附着的表面。37℃孵 用12091 育2小时。冲洗5遍，洗去残留FCS．(3)分别加入血清lOO： (1：10稀释)，每种样品用三复孔，37℃孵育1小时。冲洗5 次，洗去未被结合的血清中的蛋白质。(4)每孔加入辣根过氧 化物酶标记的羊抗人IgGloo：(1：lOOO)稀释，37℃孵育1小 时。冲洗5遍，洗去未结合的酶。(5)每孔加人底物A、B液 各50：，置暗处放5分钟，检测450rim波长下的光密度(OD) 值。阳性反应判定标准990份正常对照血清平均OD值+3 标准差(SD)。 3．高变区1序列分析： 30份高变区1全序列分别来自NCBI和SRS6服务器的 Genpept和SWIss聊蛋白库，以及Ⅱ田BI佑嘲A凇 (序列号C：d3466677。CAB41950，P26660—4，P27958， P88803，P90191—3，Q00269，Q02828，Q02829，Q03463， Q68533，Q68749，Q68798，q68801，Q68826，Q68833，Q68949，。 邻1258，Q81487。邸1495，Q81541，Q81754，0,81760， 注：共35人，其中4人在患病过程中逐渐由轻度慢肝变为中度慢 肝，1人由静止性肝硬化转为活动性肝硬化。 作者单／d【-．100039，北京解放军302医院传染病研究 所免疫研究室 结果 ·67· 1．7肽与208份HCV患者动态血清的反应结果： 表3麟高变区lN端氨基酸序列分析结果 7肽与38份轻度慢肝血清中22份呈阳性反应(57． 9％)，平均OD值为0．237±0．15；与29份中度慢肝血清中 21份呈阳性反应(72．4％)，平均OD值为0．292±0．18；；与 134份活动性肝硬化血清中119份呈阳