异硫氰酸荧光素杂化的荧光纳米材科的制备及其应用初探.pdfVIP

2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 异硫氰酸荧光素杂化的荧光纳米材料的制备及其应用初探 向蓉1，黄菊1，李东辉2+ (1．厦门大学生命科学学院；2．厦门大学医学院抗癌研究中心，厦门361005) 近年来，量子点、荧光乳液纳米微球、荧光分子掺杂的Si02纳米复合材料的出现，为解决 有机荧光探针分子存在的问题提供了新方向，也为生物标记分析提供了新的途径。有机荧光染料 掺杂Sj02纳米复合材料，有外壳的保护，具有独特的光学性质，信号大幅度放大，荧光分子不 易受环境的影响，稳定性好，并且对生物体毒性小。 应前体，再采用油包水的反相乳液法，引发硅烷化试剂水解，制备FITC核壳荧光纳米颗粒。本 法制得的核壳荧光纳米颗粒，荧光分子以共价键牢固结合在Si02网络中，克服了传统的荧光染 料泄漏问题，并且荧光信号得到很好的放大。制得的纳米颗粒粒径较小，利于实际应用。 1试验部分 1．1仪器与试剂 PerkinElmer LS．55型荧光分光光度计，H一600透射电镜，IKA磁力搅拌器。 异硫氰酸荧光素(Fluorescein 氧基硅烷(APTEOS) 1．2试验方法 1．2．1 FITC与APTEOS的共价耦连前体制各偶联方法基本与文献111相同。 1．2．2 取表面活性剂TritonX．100 FITC杂化核壳荧光纳米颗粒制备 1．77ml，正己醇1．8ml，环己 烷7．5ml，快速搅拌，混合后形成透明的反相胶束溶液，加入一定量的FITC前体溶液，再分别加 入TEOS和氨水引发硅烷化试剂的水解反应。室温下反应24小时，丙酮破乳，离心，沉淀收集 产物【劲。 1．2+3核壳荧光纳米颗粒的氨基化衍生将收集的核壳纳米颗粒重新分散到由TritonX．100，正己 醇，环己烷，组成的反胶束溶液中，加入适量的APTEOS，搅拌，再加入氨水引发水解pj，使核壳 荧光纳米颗粒表面带上氨基。 1．2．4抗体与核壳荧光纳米颗粒的偶联取适量的纳米颗粒，与～定量的人IgG在5％的戊二醛 水溶液中进行偶连【4]。 1．2．5夹心型荧光免疫分析模型实验用缓冲液将人IgG稀释为10lag／mL，加入酶标板孔中，4C 过夜，洗板。进行封闭后，加入羊抗人IgG，每孔不同的稀释浓度，置37C温育l小时，洗涤。 37(2温育1小时，洗涤。最后用稀减将微孔中的复合 然后后加入标有核壳荧光纳米颗粒的IgG 物洗脱下来，用荧光分光光度计检测信号。 大学新世纪优秀人才支持计划项目 ·通讯联系人 212 2006年11月 第四届海峡两岸分析化学学术会议论文集 湖北·武汉 2结果与讨论 2．1核壳荧光纳米颗粒的制备 本文采用油包水的反相乳液方法制备核壳荧光纳米颗粒，条件简单、温和，耗时少，且产物 收集容易。以FITC共价结合的前体为核材料，通过TEOS的水解，在核外生长网络状的结构， 制备了核壳荧光纳米颗粒。 率，且由于硅壳的保护而具有较好的光稳定性。FITC以共价键牢固结合在Si02网络中，克服了 传统的荧光染料的泄漏问题及游离FITC在水中易水解而导致荧光猝灭的问题，且荧光信号得到 很好的放大。这些优点有利于核壳荧光纳米颗粒在分析测定中的应用。 2．2核壳荧光纳米颗粒的电镜表征 制各的纳米颗粒直径约30纳米左右(图1)。由电镜 照片可以看出，纳米颗粒形状规则，尺寸均匀，具有良好 的单分散性。 2．3核壳荧光纳米颗粒结构的氨基化衍生 用带氨基的硅烷化试剂APTEOS可以在核壳纳米颗粒 表面衍生氨基，以用于标记生物探针分子。 Fig 2．4夹心型荧光免疫分析 1。焉岩嚣：rcS。en‘ 以上述纳米粒子为荧光标记物，对其应用于荧光免疫 尚未能获得良好线性响应。表明本文制备的FITC杂化的纳米粒子离实际应用上尚有距离，仍需 作进一步