爱滋检测方法和步骤.docVIP

辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-017 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 珠海丽珠试剂（双抗原夹心酶联免疫法）检测HIV抗体 实验原理 本品用钝化基因工程人类免疫缺陷病毒Ⅰ型和Ⅱ型抗原宝贝的微孔板和酶标记的HIV-1/HIV-2抗原及其它试剂组成，应用双抗原夹心法原理检测人血清或血浆中HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查及临床HIV抗体检测。 试剂组成 HIV抗原包被板 12孔×8/8孔×12 HIV酶标记物 7ml×1瓶 HIV阴性对照 1ml×1瓶 HIV阳性对照 1ml×1瓶 20倍浓缩洗液 50ml×1瓶 底物缓冲液 7ml×1瓶 底物液 7ml×1瓶 终止液 7ml×1瓶 封口袋 1个 封板膜 3张 使用说明书 1份 操作步骤 加样：将所需数量的板条固定于板架，每次试验设空白对照1孔，阳性对照2孔，阴性对照3孔分别加入阳阴性对照各50ul，其余孔加入50ul待测样品。 温育：置37℃温育30分钟。 洗涤：弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 加酶：空白对照孔不加酶标记物，其余孔加入酶标记物50ul。 温育：置37℃温育30分钟。 弃去孔内液体，将稀释后的洗液注满各孔，静置30-60秒，弃去孔内洗液。重复洗6次后拍干。 显色：每孔加入底物缓冲液50ul，再加入底物液50ul，震荡混匀，置37℃温育30分钟。 终止：每孔加入终止液50ul，轻拍混匀。 读值：用酶标仪读值，在单波长450nm或双波长450nm/630nm下读取各孔A值。 辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-062 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 判定结果： 要求： 阳性对照A值应≥0.8 阴性对照A值应≤0.12 2. 临界值（C.O.））≥临界值（C.O.）） 审核： 批 准： 批准日期：2006年07月01日 辽宁省丹东市 传染病医院检验科 作业指导书 第十七节 人类免疫缺陷病毒标准操作规程 文件编号：SH-SOP-062 版本：2006-07 生效日期：2006-07-01 北京万泰生物试剂 目的： 本试剂盒定性检测人血清和血浆中的HIV-1/HIV-2抗体，适用于献血员筛查，临床检测及血液制品检测。 原理： 本试剂和应用双抗原夹心酶联免疫法原理（ELISA）检测血清或血浆样品中人类免疫缺陷病HIV(1+2型) 抗体。与包被高纯度基因重组HIV(1+2型) 抗原，可与样品中抗HIV抗体反应，加入HRP标记HIV(1+2型) 抗原，然后用TMB地物作显色。通过酶表仪检测吸光度，从而判定样品中HIV抗体的存在与否。 试剂盒组成： HIV酶标板 12孔×8/8孔×12 HIV酶标试剂 10ml×1瓶 HIV-1型抗体阳性对照 1ml×1瓶 HIV-2型抗体阳性对照 1ml×1瓶 HIV 抗体阴性对照 1ml×1瓶 浓缩洗液 50ml×1瓶 显色剂A液 6ml×1瓶 显色剂B液 6ml×1瓶 终止液 6ml×1瓶 封口袋 1个 11. 封板膜 3张 12. 使用说明书 1份 使用仪器： 加样器 温箱 洗板机 含波长450nm的酶标仪 实验方法：1. 配液：将浓缩洗涤液用蒸馏水或去离子水20倍稀释。 2. 编号：将样品对应微孔按序编号，每板应设阴性对照３孔，阳性对照１型，２型各２孔，空白对照１孔。 　　　　　3. 加样: 分别在相应孔中加入待测样品或阴, 阳性对照100vl。 4. 温育：用封板膜封板后置37℃±1℃温育30±2分钟。 5. 洗涤：小心揭掉封板膜，用洗扳机洗涤５遍，最后一次尽量扣干。