烟草抗怪铃薯Y病毒(PVY)育种、抗性基因的克隆与功能分析.pdfVIP

摘要 virus 马铃薯Y病毒(PotatoY，PVY)是我国烟叶生产中的主要病害之一，近年来，随着农村 保护地蔬菜栽培和马铃薯种植面积的扩大，烟草PVY病毒病的发生与危害呈现急剧上升趋势，在黑 龙江、吉林、辽宁、山东、安徽和云南相继出现大面积爆发流行，造成了严重的经济损失。针对我 国烟区缺乏抗PVY品种的生产实际，本研究通过筛选烟草PVY抗源，并对主要抗源材料进行抗性遗 传分析，克隆其抗性基因，同时开展抗PVY烟草育种工作，主要包括以下内容： 1．采用人工接种方式，在温室和田间病圃中分别对17份和114份烟草种质进行PVY抗病性鉴 表现多基因水平抗性。 不完全显性，CV91为少数隐性基因控制，易受显性感病基因影响，与没有显性感病基因品种杂交表 为多数微效基因控制，且为加性基冈控制。NC55×9625组合F2代中无病株一病轻株一病重株一8—5—3， 基本表现连续分布，NC55是多数微效抗性基因。 3．利用高抗PVY的CV91做亲本，选育出了烤烟常规纯系品种龙江91i和杂种优势利用品种 LJ237，其中龙江91 薯Y病毒的烤烟品种LJ981。 4．提出微效水平抗性基因富集思路，利用中等水平抗性资源，选配适当的杂交组合，在杂交后 代材料中富集、浓缩抗性基因，得到高于抗性亲本抗性的品种，重视水平抗性资源的开发与利用。 Subtractive 5．以高抗PrY的C151为试验材料，利用抑制差减杂交技术(Suppression 的280多条EST序列进行生物信息分析和功能预测，其中与光合作用有关的RuBP羧化酶相关蛋白基 因片段96条，林烟草和绒毛烟草叶绿体DNA片段12条，与抗病性有关的有：脂质转化酶基因片段 15条，突变的过氧化氢酶基因片段8条，蛋白酶抑制剂基因片段32条，铁氧还蛋白和铁硫蛋白基因 片段26条，糖基转移酶3条，富含甘氨酸蛋白质前体蛋白9条。其他序列86条，未知基因片段71 条。 6、利用荧光定量PCR对5个可能与抗病性有关诱导表达片段的从开始接种到接种后72小时之 间的0小时，12小时，24小时，36小时和72小时5个时间点基因的差异表达，并证实了所获得的 基因序列为真实诱导的表达序列。对此序列进行RACE，最终获得一个与PVY抗病性有关的全长cDNA 序列。 C151等烟草品种扩增晒选抗性基冈，在CV91品种中克隆出了与马铃薯Y病毒抗性有关的翻译起始因 子eIF4E基因。 8、通过比对该eIF4E基因的核酸序列，发现与感病品种有两个突变位点，导致病毒基因不能翻 译，产生抗病性。 关键词：烟草马铃薯Y病毒(PVY)；抗PVY的烟草品种，抗性基因；抑制性消减杂交；eIf4E； 2 Abstraet Potatovirus ofthe one most tobaccodiseasesinChina．Asthe Y(PVY)is important expand of cultivationandthe areain greenhousevegetable potato planting recentlyyears，the occurrenceand ofPVYtotobacco have sharp trend．A damage productionappearedupward economiclosswastakenasthe great outbreak ofPVYin epidemic and Yunnantobacco areas