异种移植相关的猪肉源性逆转录病毒的调查和实验研究.pdf

异种移植相关的猪内源性逆转录病毒的 调查和实验研究 硕士研究生：刘广波 指导教师：高毅教授 汪艳副教授 摘 要 研究背景 当今，重型肝炎、肝衰竭以及肝癌是我国肝病患者死亡的主要原因，肝移 植是治疗此类疾病最有效的方法。但是，人类同种器官移植供体的日益短缺已 经成为限制器官移植的关键因素，许多患者因得不到及时的肝移植手术而丧失 存活机会。目前，解决这一难题的主要可能途径有异种移植、组织工程和干细 胞技术等。组织工程和干细胞技术虽然也是可行途径，但是距成功构建有功能 的器官和组织仍有相当一段距离；而异种移植是人们多年来探索的另一可行途 径，通过艰苦努力已获得较大进展。异种移植，即将动物的器官、组织或细胞 移植到其他种类受者，是一种可能有效缓解同种器官移植供体短缺的方法。鉴 于伦理道德的要求、生长特征、器官大小和生理特征等方面的考虑，目前研究 者首选猪作为异种移植的最佳种系来源。尽管猪到人的实体器官移植目前仍未 实现，但是猪的组织、细胞作为人体病变组织的替代品已在临床逐步得到应用。 但是，同时也出现了两大难题：一是供体与受体间可能出现强烈的免疫排斥反 应，二是可能出现病毒和病菌在种间传播。目前，猪的0【．1，3．半乳糖基转移酶 基因的敲除克服了免疫排斥反应。但是，猪细胞、组织和器官携带有猪内源性 逆转录病毒(Porcine endogenous 摘要 胞中存在前基因组或称前病毒DNA，由前病毒DNA转录合成病毒RNA，由宿主 以孟德尔遗传方式遗传给后代。正常情况下，由于长时间的进化，前病毒发生 了突变不能合成蛋白，从而其天然宿主不致病。然而，一旦跨越了种间屏障， 他们可能在新宿主体内增殖并致病。Lieber等发现与PERV高度同源的鼠内源性 逆转录病毒可使长臂猿发生白血病。由于PERV不能通过在无特定病原体条件下 饲养或者简单的异型杂交育种来消除，猪．人异种移植中仍潜在着PERV种间传播 和致病的风险。 PERV是整合到猪的基因组中的哺乳动物C型逆转录病毒，具有gag，pol， 较，将PERV分为两类，即丫类(1．5)和p类(1．4)，已证实丫1类有感染性， 其他类尚未证实有感染性。目前，人们的对PERV的研究主要集中于具有感染性 C三种亚型；其中PERV-A、B有更广泛的宿主范围，在体外可以感染多种细胞， 包括貂、鼠以及人的细胞系，而PERV-C在体外仅能感染两种猪细胞系和一种人 细胞系。 。． 感染人细胞系之后，异种移植中可能发生PERV在种间传播的潜在危险引起了人 们的广泛关注。异种组织器官移植过程中，内皮细胞位于异种移植物和受体接 血管成纤维细胞、血管内皮细胞等，而且通过逆转录活性检测证明PERV在感染 blood 细胞内复制明显。Wison等发现两个猪系的外周血单核细胞(Peripheral monouclear 在体外可以感染猪和人的细胞系。国外的研究报道中，发现PERV可在体外感染 多种人源细胞系，如来源于T细胞、骨髓细胞、NK细胞及肾脏细胞系，但这些 结果多局限于细胞系及血液中细胞，对人体实质器官细胞的PERV易感性研究较 n 硕士学位论文 胞株的易感性比PERV-A大约增强500倍。 现在为止，在接受猪移植物的人、非人灵长类和其他动物体内，还没有发 现PERV感染的证据。在一项回顾性临床调查中，160例接受猪组织治疗的病人 体内没有发现PERV感染的证据。21例接受猪胰腺移植长达4．6--8年的患者体 内也没有发现PERV感染的存在。但是，猪．人异种器官移植引起PERV感染人， 甚至导致新的感染性疾病的可能性还不能被排除。 由于清晰的遗传背景和细微的个体差异，中国小型猪成为猪．人异种移植可 能的器官供体来源。中国实验