志贺菌流行性分析与超广谱β-内酰胺酶基因型研究.pdfVIP

论文交流·耐药机制 √志贺菌流行性分析和超广谱p一内酰胺酶基因型研究 周宏伟胡慧敏陈功祥张嵘 【摘要】目的分析浙江省部分地区志贺菌流行现状、耐药性和超广谱p一内酰胺酶(extended spec— trum 13-1actamases，ESBLs)的基因型。方法收集萧山妇幼保健医院、绍兴市人民医院的24株志贺菌， 用血清凝集试验进行血清分型；用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对收集到的志贺菌进行同源性分析；琼脂稀 inhibitory 释法检测最低抑菌浓度(minimal 果显示，来自萧山的11株福氏志贺菌中9株F4型为同一克隆株。来自绍兴的5株宋内志贺菌和来自萧山 的8株宋内志贺菌分属于同一型的4个不同亚型。24株菌株中对庆大霉素和氨苄西林的耐药率较高，均 为95．8％，对头孢噻肟的耐药率为20．8％，中介率达20．8％；其中对含酶抑制剂抗生素哌拉西林／他唑巴 氏志贺菌为同一克隆株的流行，而宋内志贺菌不同地域为不同亚型的流行。志贺菌中由可接合质粒介导 的CTX—M型超广谱B-内酰胺酶是引起多种p一内酰胺类抗生素耐药和敏感性降低的主要原因。并首次在国 内宋内志贺菌中检测到CTX—M·15型超广谱p一内酰胺酶。 【关键词】 志贺菌；脉冲场凝胶电泳(PFGE)；超广谱p一内酰胺酶；基因型；CTX—M型 志贺菌是具有高度传染性的肠道致病菌，每年均散发或小规模爆发流行。近些年临床上分离的志贺 菌对常用的抗生素逐渐耐药，有的菌株甚至出现多重耐药¨’2’L4)1。以往的一线药物被超广谱B一内酰胺类 道∞’7’扎钆Ⅲ1，并且有逐步增加的趋势。我们对浙江省部分地区临床分离的24株志贺菌通过脉冲场凝胶电泳 了分析。并在宋内志贺菌中首次检测到CTX—M一15型ESBLs。’ 材料和方法 ‘ 一、材料 (pI=7．6)和ACT一1(pI=9．0)标准产酶菌株、E．coli 云松教授惠赠。 — 377 论文交流·耐药机制 素(CN)：瑞康药业集团有限公司；环丙沙星(CIP)：广州南新制药有限公司。 纸片、Nitrocefin：英国OXOID公司；等电聚焦电泳用聚丙烯酰胺凝胶(pH 熔点琼脂：上海生工生物技术有限公司。 PCR Pharmacia公司；PCR仪，GeneAmpSystem9600，美国ABI公司(Applied 11型电泳仪，北京市六一仪器厂；脉冲场凝胶电泳仪及成像系统，德国Biometra公司。 二、方法 (一)细菌的鉴定志贺菌的鉴定采用全自动微生物鉴定和药敏系统VITEK—AMS，并用诊断血清将志贺 菌鉴定到血清型。 (二)琼脂释法药敏试验参照CLSI方法和判断标准检测12种抗生素对细菌的最低抑菌浓度 (MIC)In]。 他啶(CAZ)、头孢他啶+克拉维酸(CD∞)双纸片确证试验来筛选产ESBLs的志贺菌。 EC600(Raf+， (四)接合实验供体菌为ESBLs表型阳性的志贺菌，受体菌为利福平耐药的E．coli Lac。)。供体菌和受体菌分别接种于5ml 和供体菌的菌液到新的5ml 混合于经高压灭菌的1．5ml离心管，置35。C孵育4小时，取一定量接合前和接合后菌液均匀涂布于含抗 取单个菌落转划筛选平板，置35℃孵育24小时。用VITEK—AMS细菌鉴定仪对接合子作生化鉴定。 (五)等电聚焦分析(IEF)采用超声破碎法提取产酶的原始志贺菌及其接合子的p一内酰胺酶粗提液 2．5mA 2．5mA3．5W