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第二章 色谱技术 第一节 色谱学概论 色谱技术是利用混合物中各组分理化性质（分子形状和大小、带电状态、溶解度、吸附 能力、分配系数、分子极性以及分子的亲和力等）的差别，使各组分以不同程度分布在两相 中，其中一相为固定的（称为固定相），另一个相则流过此固定相（称为流动相），造成流动 相对固定相作单向相对运动。流动相推动样品中各组分经固定相向前迁移，使各组分、迁移 速度不同，而对物质进行分离的方法。这一技术具有分离效率高，应用范围广、分析速度快、 样品用量少、易于自动化及能够与其它方法配合使用等优点，已成为近代生物学、生物化学、 分子生物学、生物工程等学科中的重要研究手段，并发展成为一门对物质进行分离、分析、 纯化与鉴定的综合性技术。 1903 年，俄国植物学家 Tswett 将植物叶子中各种色素的石油醚提取物加到菊根粉或碳 酸钙填充在玻璃管内的填充柱上端，然后用石油醚从上向下淋洗，由于移动速度不同，胡萝 卜素、叶黄素、叶绿素a 和 b 依次在柱内排列成连续的环状色带。他称这种混合物分离的方 法为色谱法（chromatography ），又称色层分析法或色谱法。此法所用的玻璃管称之为色谱 柱（chromatographic column ），管内的碳酸钙填料叫固定相（stationary phase ），淋洗液叫流 动相（mobile phase ）。这是一种经典的液相色谱分析方法，随后被广泛用于无色物质的分离 与色谱。40 年代出现以滤纸为支持物的纸色谱（paper chromatography ），50 年代出现了薄层 色谱（TLC,thin-layer chromatography ）。1952 年 Martin 等人首次以气体为流动相并配合微量 酸碱滴定发明了气相色谱（GC，gas chromatography ），为挥发性化合物的分离测定带来了划 时代的变革。60 年代末在经典液相色谱的基础上发展出高速、高效的高效液相色谱 （HPLC ， high performance liquid chromatography ）。 1975 年离子色谱的出现和金属鏊合色谱的发展改 变了以往色谱法主要用于有机物分析的局面，广泛用于无机离子和金属元素的分离分析。以 -14 后又出现了可以色谱柱口径几微米到几百微米可以检测纳升级或 10 克极样品的毛细管色 谱。气相色谱-质谱（GC/MS ）、气相色谱-傅立叶变换红外光谱（GC/FTIR ）等联用技术为 复杂混合物的分离、鉴定效率大大提高，利用 GC/MS 可以分析鉴定出汽油中近 200 个成分。 借助计算机技术的发展，现代色谱技术发展趋向于自动化、智能化。 色谱技术有多种分类方法（表 2 －1），同一个色谱类型可以有不同的名称。（1）按照固 定相的附着方式，可以分为柱色谱和平板色谱。前者固定相装在色谱柱内，后者的固定相呈 平板状，纸色谱中固定相是滤纸附着的水膜；固定相均匀涂布在塑料（或玻璃、金属）板上 称之为薄层色谱；若将固定相软支持物上则又叫薄膜色谱。（2 ）按照分离原理，可以分为吸 附色谱、分配色谱、离子交换色谱、凝胶色谱和亲和色谱（包括络合和鏊合）。（3 ）按照流 动相物理状态，可分为液相色谱和气相色谱。液相色谱根据固定相物理状态不同又包括液- 液色谱和液-固色谱，同理气相色谱包括气-液色谱和气-固色谱。其中若流动相处 表 2-1 色谱法的一般分类 装置 类型 名称 原理 基质或载体 形状 固定相 流动相 疏水力和静电引 硅胶、氧化羟基磷灰石、活性 吸附色谱 柱状 固体 液体 力 炭等 分配色谱 反 向 分 配 溶解度 柱状 液体 液体 纤维素、硅藻土、硅胶等 色谱 离 子 交 换 离子交换树脂、纤维素、葡聚 离子间结合力 柱状 固体 液体 色谱 糖和人造沸石等 柱 亲和色谱 亲和力 柱状 固体 液体 带配基的葡聚糖和琼脂糖等 色 交联葡聚糖、交联琼脂糖、生 凝胶色谱 排阻效应 柱状 液体 液体 物胶等 谱 电荷效应、离子间 聚焦色谱 柱状 固体 液体 多缓冲离子交换剂 PBE 结合力 高 效 液 相 随固定相基质变 固体 吸附剂、离子交换剂、亲和吸 柱状 液体 色谱 化而变化 液体 附剂、多缓冲离子交换剂等 与吸附色谱和分 固体 气相色谱 柱状 气体 吸附剂活有机溶剂液膜 配色谱原理相同 液体 纸色 滤 纸 分 配 溶解度 薄层 液体 液体 滤纸 谱 色谱 吸附色谱 疏水力、静电引力 板状 固体 液体 硅胶、氧化铝等 分配色谱 溶解度 板状 液体 液体 纤维素、硅胶、硅藻土等 薄 层 离 子 交 换 离子间结合力 板状 固体 液体 各