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第五章 植物细胞工程 细胞工程 动物细胞工程制药 一 概述 二 动物细胞的形态和生理特性 三 生产动物细胞的要求和获得 四 动物细胞的培养条件和培养基 五 动物细胞培养的基本方法 六 动物细胞大量培养的方法和操作方式 七 动物细胞生物反应器 八 动物细胞产品的纯化方法和质量要求 九 动物细胞产品的制造实例 十 动物细胞制药的前景与展望 植物细胞工程制药 一 基本概念 二 植物细胞工程发展简史 三 植物细胞的形态及生理特性 四 植物细胞培养的基本技术 五 影响植物次级代谢产物积累的因素 六 植物细胞培养的生物反应器 七 进展与展望 第一节 基本概念 1. 植物细胞的全能性 2. 植物组织和器官培养 3. 植物的分化 4. 脱分化 5. 再分化 6. 植物无菌培养 7. 细胞培养 8. 分生组织培养 9. 外植体 10. 无性繁殖系 11. 突变体 12. 继代培养 13. 次级代谢作用和次级代谢产物 植物细胞全能性 在离体培养下,植物的体细胞或性细胞被诱导产生器官分化和再生,成为具有与母体植株相同遗传信息的植株的能力。 植物细胞全能性的相对性 不是所有基因型的所有细胞在任何条件下都具有良好的培养反应; 动、植物细胞全能性的表现程度存在明显差异。 细胞全能性并不意味着任何细胞均可以直接产生植物个体。 植物细胞分化 基因的差异性表达,即为细胞分化;具体表现为内部生理变化和外部形态变化。 细胞分化使细胞功能趋于专门化,更有利于提高生理功能的效率。因此,分化是进化的表现,越高级的植物类群,分化水平越高,细胞分工越细,机体代谢水平也越高。 愈伤组织(callus):脱分化后的细胞,往往经过细胞分裂形成一团无特定结构和功能的松散的薄壁细胞团。 外植体:用于植物组织(细胞)培养的器官或组织。 第二节 植物细胞工程发展简史(了解) 第三节 植物细胞的形态及生理特性 一 植物细胞的形态 二 植物细胞的结构特征 三 植物细胞的主要生理活性物质及其他化学组分 四 植物培养细胞的生理特性 一 植物细胞的形态 植物细胞的亚显微结构 模式植物细胞构造 动植物细胞区别 细胞壁、质体、液泡三部分是植物细胞特 有的结构,动物细胞没有 三 植物细胞的主要生理活性物质及其他化学组分 1 生理活性物质 A 酶 B 维生素 C 植物激素 D 抗生素和植物杀菌素 2 其他成分 A 生物碱 B 糖苷类 C 挥发油 D 有机酸 四 植物培养细胞的生理特性 植物组织培养和动物细胞培养的比较 第四节 植物细胞培养的基本技术 一 植物材料的准备 二 培养基及其组成 三 培养方法 最重要的是无菌。 植物组织培养的外植体必须是无杂菌材料。 植物组织培养时表面处理的常用灭菌剂(表5-5) 不同器官的灭菌方式不同(表5-6) 1 无机盐: 大量元素:N, S, P, K, Mg, Ca, Cl, Na 微量元素:Fe, Mn, Zn, Cu, Co, Ni等 2 碳源: 糖类,肌醇等 直接通过光合作用吸收CO2 4.氮源 氮源有还原态氮(NH4+)和氧化态氮(NO3-)两种 在以KNO3为唯一氮源(如White培养基)的培养上建立起来的愈伤组织,去掉生长素以后不能形成胚。 5.维生素 三 培养方法 按培养基类型分为: 固体培养和液体培养 1. 分批培养法 2. 半连续培养法 3. 连续培养法 4. 固定化培养法 植物组织培养技术的流程 第五节 影响植物次级代谢产物积累的因素 一 外植体选择 二 培养条件的影响 一 外植体选择 不同外植体的悬浮细胞培养物,其最大次级代谢产物的累积时间各异。 二 培养条件的影响 1. 内在因素(菌种和营养条件) 接种和诱导,培养基 2. 外在因素(环境条件) 温度,搅拌,容器,光 3. 两步法培养 第六节 植物细胞培养的生物反应器 一 机械搅拌式生物反应器 二 鼓泡塔生物反应器 三 气升式生物反应器 四 转鼓式生物反应器 五 固定化细胞生物反应器 六 各种生物反应器性能比较 第七节 进展与展望 一 诱导子在植物细胞工程研究中的应用 二 前体饲喂 三 两相法培养 四 转基因技术在次级代谢产物中的应用 五 植物生物转化技术与生物制药 * * 细胞脱分化(dedifferentiation) 是指失去已分化细胞的典型特征,或消除了细胞分工,使之回复到分生组织状态,或胚性细胞状态。 细胞脱分化阶段 启动阶段,表现为细胞质增生,并开始向细胞中央伸出细胞质丝,液泡蛋白体出现; 演变阶段,此时细胞核开始向中央移动,质体演变成原质体; 脱分化终结期,细
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