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蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究_药学论文 蜈蚣多糖对Hela细胞的增殖抑制作用研究_药学论文 作者：李兴暖　韩雅莉　余卫国 【摘要】 目的研究蜈蚣多糖对人宫颈癌细胞Hela细胞的抑制作用及作用机制。方法用MTT法检测蜈蚣多糖对Hela细胞生长的抑制作用；流式细胞仪和Annexin V-FITC/PI双荧光染色分别检测蜈蚣多糖对Hela细胞周期及凋亡情况的影响。结果在一定浓度范围内蜈蚣多糖可显著抑制Hela细胞的增殖，改变Hela细胞的细胞周期，使细胞阻滞于G2/M期，并能诱导细胞凋亡。结论蜈蚣多糖可能通过改变Hela细胞的细胞周期，诱导细胞凋亡，从而对Hela细胞的增殖有一定的抑制作用。 【关键词】 蜈蚣多糖；细胞周期；细胞凋亡 　　Abstract:ObjectiveTo investigate the inhibitory effects of polysaccharide from Scolopendra subspinipes mutilans (PSSM) on Hela cells and its mechanism. MethodsMTT assay was used to test the effect of growth inhibition on Hela cells. Cell cycle and cell apopotsis were detected by flow cytometry and AnnexinV-FITC/PI fluorescence staining.ResultsPSSM could obviously inhibit the proliferation of Hela cells at specific concentration range, change the cell cycle of Hela cells and block Hela cells at G2/M phase, and induce cell apoptosis.ConclusionPSSM can inhibit the growth of Hela cells by changing cell cycle and inducing apoptosis. 　　Key words:Polysaccharide from Scolopendra subspinipes mutilans; Cell cycle; Cell apoptosis 　　少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch又名百足, 属节肢动物门，多足纲，唇足目，螟蚣科动物，为《中国药典》记载的正品药材，为我国传统的镇痉、通络类药物。祖国医学记载和临床实践均已证明其具有镇静熄风、通络止痛、解毒散结等药用功效［1］。现代药理实验也证明了蜈蚣具有抗肿瘤和抗动脉粥样硬化等作用［2,3］，临床用于治疗肿瘤以及心脑血管病等症。传统中药均以整虫入药，但蜈蚣体内成分复杂，且有效成分尚不明了，无法对其药理作用做进一步研究。为了探讨蜈蚣抗肿瘤作用，本文以少棘蜈蚣为原料，对其体内多糖进行了分离纯化，并进一步对其进行了Hela细胞增殖的作用的研究，为进一步探索蜈蚣抑瘤作用机制奠定基础。 　　1 材料 　　1.1 材料 　　少棘蜈蚣Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch购自汕头市恒青药店，由广东工业大学生药研究室对其进行种类鉴定。人宫颈癌Hela细胞，由汕头大学医学院分子病理实验室提供，微血管内皮细胞MVEC，由汕头大学多学科研究中心提供。 　　1.2 试剂与仪器 　　DEAE-52为 Whantman 公司产品；1640培养基、胰蛋白酶、噻唑兰（MTT）、碘化丙啶（PI）均购自Sigma公司；Annexin V-FITC/PI凋亡检测试剂盒购自北京宝赛生物技术有限公司；新生牛血清购自杭州四季青生物有限公司。Thermo Labsystems酶标仪（Thermo公司）；Shel Lab二氧化碳培养箱； EpicsXL 流式细胞仪（Backman Coulter公司）；倒置显微镜、荧光显微镜（Olympus公司）；Nikon Coolpix 4500数码相机。 　　2 方法 　　2.1 蜈蚣多糖(polysaccharides from Scolopendra subspinipes mutilans L. Koch, SSP)的制备少棘蜈蚣87 g 研钵磨碎，加入1 000 ml蒸馏水90℃恒温水浴搅拌4 h，过滤，残渣加入500 ml蒸馏水，重复上述步骤，过滤，合并滤液，浓缩滤液。取上清液，加5倍体积95％乙醇4℃静置过夜，离心，去上清液，沉淀用少许蒸馏水溶解