半夏组织培养研究概况.docVIP

半夏组织培养研究概况 组织培养，又称离体培养，是在无菌的条件下将活器官、组织或细胞放置在适宜的培养基内，并放在适宜的环境中，进行培养而重新形成的细胞、组织或个体。该技术已广泛应用于农业生产、医药开发等研究。应用药用植物组织培养技术主要包括以下两个方面：一是利用组培快繁和脱毒技术大规模生产优质种苗满足的需要；二是通利用组织培养产生的愈伤组织或悬浮细胞中直接提取药物所需的有效成分或通过生物转化、酶促反应等手段间接获取药物所需药物。 为了解决某些药用植物天然野生资源过度采挖，人工栽培繁殖系数低，用种严重不足等问题，已经药用植物对植物组培快繁进行了广泛的研究和应用。组培快繁技术具有成本低、效率高、等优点，可以有效解决某些有性繁殖系数低的药用植物的用种问题。我国药用植物组织培养始于上世纪50年代，罗士韦(1964)首次报道了我国关于人参组织培养获得成功的研究成果。1983年全国召开了第一届药用植物组织培养讨论会。目前为止，我国药用植物已有100多种，其中大多数为珍贵的药用植物通过组培快繁技术繁殖获得了成功。 目前，通过组培快速繁殖已获得了半夏无菌苗苗。张振媛（2008）报道了不不同激素对不同品系荆半夏的诱导作用是不同的。黄海波等人比较不同激素对半夏植株再生的影响，结果发现较低浓度的6-BA和NAA对半夏植株再生有明显的促进作用。张丽梅等（2003）以珠芽和块茎为外植体在添加1.0 mg/L BA的MS培养基中进行培养，发现不需要转移培养，就能在外植体上可长出多株根系粗壮，植株健壮小苗。郝会军（2008）等报道了半夏组培苗炼苗技术的研究，发现对组培获得的无菌苗进行炼苗处理可以显著提高其无菌苗在大田的移栽成活率。 贾永芳等人采用半夏细胞悬浮培养对植株再生进行了研究，半夏幼嫩叶片在MS + 2.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA培养基上一个月内可以诱导出较好的愈伤组织，取颜色鲜黄的愈伤组织进行悬浮培养，经34次继代后得到分散性好的细胞悬浮系，并将细胞悬浮液过滤得到的小细胞团接种于MS + 0.2 mg/L NAA + 1.0 mg/L BA分化培养基上，40 d分化出小植株。侯学文(2000)以B5培养基，添加4.5 umol/L 2,4-D和2.3 umol/L KT为基本培养基，设置20、30、40、50 g/L蔗糖，考察不同蔗糖浓度对玫瑰茄细胞生长的影响，发现蔗糖浓度在20-50 g/L范围内，当40 g/L时，蔗糖是作为限制性基质而存在的，而蔗糖浓度超过40 g/L时，蔗糖就表现出基质抑制效应。范美华(2004)在悬浮培养中比较两种碳源，发现葡萄糖比蔗糖更有利于愈伤组织的生长和总生物碱的合成，同时对钙盐、Fe盐及肌醇发现钙盐浓度为1.8 mmol/L、Fe盐浓度为0.06 mmol/L和肌醇浓度为100mg/L最适合细胞生长和总生物碱形成。罗成科(2006)利用半夏幼嫩叶片接种到固体愈伤组织诱导培养基(MS + 3%蔗糖 + 0.7%琼脂 + 3.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA)获得的愈伤组织继代到液体培养基(MS + 3% 蔗糖 + 3.0 mg/ L2,4-D + 0.5 mg/L BA + 300 mg/L LH)中上，建立了胚性细胞悬浮系。刘永红（2010）将外植体在MS + 0.2 mg/L NAA + 1.0 mg/L 6-BA的培养基上诱导出未的分化的小块茎继代于添加0.6 mg/L ABA的1/2MS液体培养基中，建立了小块茎的悬浮培养体系。同时发现组培小块茎的总生物碱含量都高于栽培块茎。丁兰(2007)以1/2 MS + 2.0 mg/L 2,4-D + 0.5 mg/L BA + 0.5 mg/L NAA为培养基,培养条件为温度232℃,转速90 rpmpH值6.0进行半夏悬浮培养,发现黑暗培养有利于悬浮细胞的增殖,悬浮继代培养后再添加0.5 mg/L BA + 0.5 mg/L NAA可诱导分化出芽和根,形成完整的植株。低温诱导细胞同步化可以克服化学药物筛选法容易引起染色体变异的缺点,并且操作起来简单、方便。毛春娜(2011)探索适合半夏悬浮培养细胞的低温诱导同步化时，发现8℃低温下处理24小时效果最好。 Gautheret(1942)首次利用植物愈伤组织和悬浮培养细胞获得了植物的此生代谢产物。此后研究者对药用植物的组织培养物得药效成分进行集中研究，用于与医药生产相结合。上世纪70年代，Furuya等人研究发现，粗人参皂苷的干物质含量，愈伤组织中含21.11%，冠瘿组织中含19.30%，再分化根中含27.40，均显著高于天然根的4.10%的含量。利用长春花的悬浮培养，将长春花碱和长春新碱生物转化成为阿吗碱和其他形式蛇根碱，为生产抗癌药长春新碱及长春花碱提供新的原料（Scot