脲酶测定方法.docVIP

脲酶测定(比色法) 脲酶是对尿素转化起关键作用的酶，它的酶促反应产物是可供植物利用的氮源，它的活性可以用来表示土壤供氮能力。大多数细菌、真菌和高等植物具有脲酶。它是一种酰胺酶，能酶促有机质分子中肽键的水解。土壤的脲酶活性与土壤的微生物数量、有机物质合量、全氮和速效氮含量呈正相关。人们常用土壤的脲酶活性表征土壤的氮素状况。 土壤脲酶是一种酰胺酶，能促进土壤有机质分子中酰胺键的水解，因此，在富含有机质的土壤中，脲酶的活性一定高。脲酶是一种高度专性的酶，能酶促尿素的水解，因此可以测定产生的氨或二氧化碳的量，或测定基质尿素的减量，以表示脲酶的活性。 土壤中脲酶活性的测定是以脲素为基质经酶促反应后测定生成的氨量，也可以通过测定未水解的尿素量来求得。本方法是测定生成的氨量。 试剂：1）甲苯 2）10%尿素：称取10g尿素，用水溶至100ml。 3）柠檬酸盐缓冲液（H6.7）：184柠檬酸蒸馏水147.5g氢氧化钾溶于蒸馏水将两溶液合并，用1mol/LNaOH将H调至6.7，用水稀释至1000毫升。 4）苯酚钠溶液（1.35mol/L）：62.5苯酚溶于少量乙醇，加2甲醇和18.5丙酮，用乙醇稀释至100（A），存于冰箱中；27NaOH溶于100水（B）。将AB溶液保存在冰箱中。使用前将溶液各20混合，用蒸馏水稀释至100。 5）次氯酸钠溶液：用水稀释试剂，至活性氯的浓度为0.9%