人皮肤成纤维细胞的高效分离培养及鉴定.pdfVIP

· l970 · 广东医学 2008年 12月 第29卷第 l2期 GuangdongMedicalJournalDec．2008，Vo1．29，No．12 解决排斥问题。因而，发展一种能从患者 自体取少量 可在体外长期传代，增殖活力较好 ，为后续的复合型人 皮肤，并在体外快速构建复合型组织工程皮肤的方法 工皮肤的构建打下基础。 十分必要。 参考文献 皮肤包括表皮和真皮，二者结合紧密，难以消化。 [1] SHERIDANRL，TOMPKINSRG．Culturedautologousepitheli· 本研究中所选用是 Ⅱ型胶原酶，特异性使表皮与真皮 Unlinpatientswithbumsofninetypercentofmoreofthebody 分离，真皮的结构变得松散，其内的细胞容易迁出，再 surface[J]．JTrauma，1995，38(1)：48—50． 由胰蛋白酶辅助消化即可得到较纯的细胞，且对细胞 [2] HANSBROUGHJF，COOPERML，COHENR，eta1．Evalua- tionofa biodegradable matrixcontaining cultured human fibro- 的损伤较小 。，同时减少了培养体系中的表皮细胞，因 blastsasadermalreplacementbeneathmeshedskingraftsonathy— 此原代培养的细胞更纯，更有利于细胞的生长 。本 micmics[J]．su唱ery，1992，1l1(4)：438—446． 研究中细胞免疫荧光显示呈 Vimentin阳性，再结合其 [3] EAGLSTEINWH，ALVARESOM，AULETYAM，eta1．Acute 分离时的组织来源 ，以及其长梭形 、栅栏状、漩涡状生 eexisionalwoundedtreatedwithatissueengineeredskin(Apfigraf) 长的特点，证实其为成纤维细胞。 [J]．DemiatolSurg，1999，25(3)：195—201． 在实验中还应注意以下问题：①取材患者的年龄 [4] 杨斌，洪清琦，徐令，等．组织工程皮肤种子细胞的同期快速 分离[J]．中国修复重建外科杂志，2006，20(7)：754—757． 尽可能小，其成纤维细胞的增殖活力较好。②标本要 [5] 薛庆善．体外培养的原理与技术 [M]．北京：科学技术出版 彻底清洗，临床取材标本极易污染。③真皮层尽可能 社 ．2001：444—445． 剪碎，有利于成纤维细胞的迁出。④组织种植后添加 (收稿 日期：2007—11—23 编辑：蔡欣) 培养液要少，不要使组织浮起来。该方法得到的细胞 冻存对血管内皮干细胞增殖和分化能力的影响 黄勇 罗慧 中山大学附属第三医院 胃肠外科，手术室(广州 510630) 【摘要】 目的 探讨冻存对人脐血来源血管内皮干细胞 (EPCs)增殖、分化能力的影响。方法 采用密度梯 度离心法结合MACS分选法提取人脐血中CD133细胞，进行流式细胞仪检测纯度；将 EPCs冻存 3，6，12，18个 月后进行常规培养、诱导分化，利用细胞免疫组化进行鉴定，并比较不同冻存时间的EPCs的增殖能力。结果 经 流式细胞仪检测 CD133 细胞平均 占单核细胞的(1．13±0．10)％．磁珠分选所得 CDI33 细胞平均纯度为(91．4