多孔类碳糊电极的羧基化及其对Escherichia ocli O157-H7的检测.pdfVIP

第38卷 分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告 第9期 2010年9月 ChineseJournalofAnalyticalChemistry 1261～1266 DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01261 多孑L‘‘类碳糊电极的羧基化及其对 Escherichiaocli 0157：H7的检测 许利剑1’2’3 杜晶晶3 邓燕1，3 李智洋1 徐春祥1，2 何农跃“’3 汪华4 史智扬4 1(东南大学生物电子国家重点实验室，南京210096)2(东南大学电子科学与工程学院，南京210096) 3(湖南工业大学绿色包装与生物纳米技术应用实验室，株洲412008) 4(江苏省疾病预防控制中心卫生部肠道病原微生物重点实验室，南京210009) 摘要以吡咯为前驱体，羧基化碳纳米管、石墨粉为填料和碳酸钙微球为模板直接诱导合成，制备出一种高 灵敏的多孔“类碳糊电极”生物电化学传感器，讨论了羧基化碳纳米管含量、银染时间对检测结果的影响。结 odi 果表明，最佳羧基化碳纳米管含量为8％，最佳银染时间为12rain，银的阳极溶出峰电流与E0157：肿浓 度在1．0×104—1．0×106 ocli 数(譬)为0．9912，检出限为5．1×103cell∥rIlL，实现了对E0157：H7快速、准确地检测。 关键词羧基化碳纳米管；多孔“类碳糊电极”；生物电化学传感器；金标银染；生物电子；大肠杆菌 1 引 言 后可以导致婴幼儿腹泻、出血性结肠炎、溶血性尿毒综合症和血栓性血小板减少性紫癜甚至死亡¨“J。 它是最危险的病原体之一，感染剂量非常低。如何快速地检测出该菌是疫情控制的关键，因此研究快速 准确地检测大肠杆菌0157：H7的新方法具有重要意义【5。J。已有许多分析研究工作者先后采用磁酶 免疫电化学发光法捧．9J、磁酶免疫电化学法【l引、化学发光磁酶免疫法¨1‘、石英晶体压电传感器(QCM) 以及双抗夹心ELISA法¨21对其检测进行了研究，但这些方法大多有检测时间长、操作复杂、仪器昂贵或 者灵敏度不高等不足。本研究在前期工作基础上【1¨”J，以吡咯为前驱体，石墨粉和羧基化碳纳米管为 填料、碳酸钙微球为模板直接诱导合成，制备一种新型高灵敏的多孔功能化“类碳糊电极”生物电化学 传感器，该电化学生物传感器具有比表面大，导电性好，灵敏度高，易于长期保存等特点，而且避免了粘 接剂的使用，彻底改变了传统碳糊电极的制备方法，为进一步提高电极的选择性和灵敏度，满足对一些 突发性疾病(如大肠杆菌等)快速、准确地检测，并利用羧基化碳纳米管掺杂方法对电极表面进行直接 功能化，结合金标抗体和银染放大的方法，用于大肠杆菌0157：H7的检测，制备出高灵敏高选择性的电 化学生物传感器。 2 实验部分 2．1主要试剂 多壁碳纳米管(MWNT)：深圳纳米港提供，纯度大于95％，长度与直径分别为5～15 Ixm和20～ 40nm，使用前于100oC真空干燥12h；石墨粉(光谱纯，上海试剂)；液体石蜡(上海凌峰试剂厂)；吡咯 ocli (南京化学试剂有限公司)；E 0157：H7菌株和人工接种了金黄色葡萄球菌和E-ocli0157：H7的 牛肉膏培养样品均由江苏省疾病预防控制中心提供；纯化兔抗E．ocli0157：H7多克隆抗体(2g／L)、纯 化鼠抗E．ocli0157：H7单克隆抗体(2 mol／L g／L)均购自宁波良瑞抗体生物技术公司；0．05 TB(Tris． 2009．12