多肽串联基因构建策略 .pdfVIP

中国生物工程杂志　ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００９，２９（８）：１０７～１１２ 多肽串联基因构建策略 张　军　杨雅麟　田子罡　王建华 （农业部饲料生物技术重点实验室 中国农业科学院饲料研究所　北京　１０００８１） 摘要　构建串联表达载体可有效提高小分子重组蛋白（肽）表达量和结构稳定性，并能屏蔽毒蛋 白对宿主的伤害作用，因而被广泛采用。比较分析和综述了非对称粘性末端互补法、接头连接 法、同尾酶法、表达盒串联法等４种多聚体、多拷贝基因串联表达载体的构建方法特点和适用范 围。从效率、精度和产物切割等方面阐述了串联表达载体构建策略的选择依据。 关键词　多肽　多聚体　多拷贝　首尾相连　构建 中图分类号　Ｑ８１９ ［３］ 　　随着基因工程技术发展，一些具有生物活性的小 串联多聚体形式的表达可有效屏蔽宿主毒性 ；（３）多 ［１］ 分子多肽如抗菌肽 等受到高度重视。采用基因工程 聚体表达产物更稳定，Ｓｈｅｎ等通过脉冲追踪实验发现， ［９］ 手段构建表达生物活性肽的基因工程菌遇到表达限 随着多聚体聚合度增加，多聚体半寿期不断延长 。 ［２］ 制 ：（１）产物不稳定。多肽分子量小，易被宿主蛋白 因此对小分子肽采用构建多聚体方法提高表达量有突 ［３］ 酶识别并降解为无活性的寡肽片段 ；（２）产物毒性如 出优势。含有二硫键的多肽或分子量较大蛋白的表达 抗菌肽在表达过程中通常会对宿主菌的生长产生反馈 产物面临二硫键复性和构象正确折叠问题，随着多聚 抑制作用甚至直接杀死宿主菌，被认为是制约抗菌肽 体中串联单体增多，其二硫键复性和构象折叠情况愈 ［４］ ［１０］ 表达量提高的直接原因 。 益复杂 ，不易保持产物活性。而以含有目的基因的 　　小分子多肽与宿主标签蛋白融合表达有利于提高 完整操纵子序列为串联单元构建多拷贝重组载体，表 ［５］ 达产物即为目的蛋白单体，既可提高表达量又能有效 多肽稳定性降低产物毒性和提高表达量 ，其缺陷在 于目的肽在融合蛋白中所占比例小，造成宿主表达潜 解决上述难题。迄今多种肽的多聚体、多拷贝形式已 ［６］ 成功表达（表 能浪费 ，而减小标签蛋白长度又降低融合蛋白稳定 １）。本文综述了几种构建多聚体、多拷贝 ［７］ 性 。将多肽基因串联表达可有效解决以上问题：（１） 基因的常用方法。 ［８］ 串联增加了多肽基因数量，有利于提高表达量 ；（２） 表１　已构建的串联多聚体、多拷贝基因 Ｔａｂｌｅ１　Ｔｈｅｃｏｎｓｔｒｕｃｔｅｄｔａｎｄｅｍｍｕｌｔｉｍｅｒｓ（ｃｏｐｉｅｓ）ｇｅｎｅｓ 碱基 多聚体、多拷贝体 名称 构建方法 表达多聚体 宿主 表达量