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朱立平 等：等离子体改性聚吡咯膜共价固定乳酸脱氢酶 64 1 等离子体改性聚吡咯膜共价固定乳酸脱氢酶＊ 朱立平，胡学清，陆 云 （南京大学 高分子科学与工程系配位化学国家重点实验室，江苏 南京210093 ） 摘 要： 采用氨等离子体表面改性聚吡咯，使其表面具有活性 分析仪上以1. 0mA/ cm2 的电流密度，恒电流电解1000S ，得到附 氨基，并成功地将具有生物活性的乳酸脱氢酶共价连接在改性 在金电极上的PPY 导电膜。将附在金电极上的PPY 导电膜置 聚吡咯表面。用反射红外光谱研究了氨等离子体处理前后聚吡 于等离子体反应室中，进行等离子体处理（NH / N 流量为 3 2 咯及聚吡咯酶多层薄膜的表面微观结构。紫外光谱和循环伏安 20mI/ min（NH % 4 % ），载气Ar 流量为45mI/ min ，放电电流为 3 测试结果证实，表面固定了乳酸脱氢酶的聚吡咯多层薄膜具有 50 ~ 80mA ，反应时间为 1min ），得到NH3 等离子体表面改性的 生物催化活性和电化学活性，有望作为丙酮酸生物传感器。 PPY 导电膜。 关键词： 氨等离子体；改性聚吡咯；乳酸脱氢酶；生物催化活 2 . 2 酶的固定化 性；生物传感器 将等离子体改性膜电极浸入8% 戊二醛（GA ）中反应241 。 中图分类号： TO324 . 8 ；O814 . 2 文献标识码：A 经去离子水和磷酸缓冲溶液反复冲洗后，再将此膜电极浸入含 文章编号：1001-9731（2004 ）05-064 1-03 L-乳酸脱氢酶（兔肌）（L-Lactic de1ydrOgenaSe ，LDH ）的缓冲溶 液中反应121 ，取出后用去离子水和磷酸缓冲溶液反复冲洗，待 1 引 言 用。另取未经过等离子体处理的聚吡咯进行同样的处理以作比 导电聚合物制备电化学生物传感器已有广泛研究。使用聚 较。 吡咯（PPY ）作为固定化酶基体，酶失活少、制备方便、过程易控 2 . 3 反射红外光谱表征 制、在广泛的pH 范围内具有较高的导电性，可以加快酶与电极 用NexuS 870 FT-IR 傅立叶变换红外光谱仪测定PPY 导电 材料间的电子传递，且由于PPY 本身带正电，在制备PPY 膜时 膜、等离子体改性PPY 膜和固定化酶的PPY 导电膜的反射红外 能够将带负电的酶固定于膜中，是人们研究的热点［1 ~ 3 ］。用 光谱。 PPY 制备的传感器具有信号大的优点，但PPY 具有较为疏松的 2 . 4 紫外分光光度法（UV3100 SHIMADZU 紫外分光光度仪） 结构，易使酶流失。有研究用聚合含活性基团的吡咯衍生物单 测定催化活性 体或用吡咯与含活性基团的单体共聚的方法得到活性PPY ，然 将0 . 1mI 0 . 02mOI/ L 还原辅酶 二钠盐（NADH ）溶液和 ! 后再通过这些活性基团用共价法把酶、抗体等固定化在 PPY