双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法.pdfVIP

ISSN1007—7626 中国生物化学与分子生物学报 2005年10月 CN11-3870／Q Chinese of andMolecular 21(5)：691～694 JoumalBiochemistry Biology ·技术与方法· 双向凝胶电泳比较三种常用蛋白质提取方法 翁 瑜1’，㈦， 曾群力2’，引， 姜 槐引， 许正平2’3’“ (1’浙江大学生命科学学院；2’浙江大学医学院浙江省生物电磁学重点研究实验室；3’浙江大学医学院环境基因组学研究中心，杭州310031) 摘要组织(或细胞)的蛋白质提取效率直接影响蛋白质双向凝胶电泳(2一DE)的分辨率．为探索建 立适用于人乳腺癌细胞株MCF．7蛋白质提取的最佳条件，比较目前在双向凝胶电泳中常用的3种 准裂解液或含硫脲裂解液提取其总蛋白质，然后进行双向凝胶电泳，并根据凝胶上蛋白质斑点的丰 度和分布特点判断所得双向电泳图谱的质量，以确定MCF．7细胞蛋白质提取的相对最佳方法．结 4．7～ 果显示，M—PER试剂法得到的图谱分辨率较低，蛋白质主要集中分布在分子量15～70kD，pH 6．3的范围内；标准裂解液法得到的图谱分辨率有所提高，蛋白质分布比M．PER试剂法得到的图谱 广；硫脲裂解液法得到的图谱是三者中分辨率最高的，尤其是高丰度蛋白和高分子量蛋白分离效果 比前两者好．结果表明，在3种常用的蛋白质提取方法中，硫脲裂解液对细胞蛋白质的溶解性最佳， 相对更适合于提取MCF．7细胞的蛋白质，并与双向凝胶电泳条件更兼容． 关键词 蛋白质提取，双向凝胶电泳，MCF．7，条件优化 中图分类号Q503 ofThreeProteinExtractionMethodsTwo． Comparison by Dimensional ElectrophOresis WENG Yul’’2’，ZENG Huai2’，XU Qun—Li2’，3’，JIANG Zheng．Pin92’’3’+ Environmental Laboratory，”Research Genomics， (”CollegeofLifeSciences，”BioelectromagneticsCenterfor School UnivemityofMedicine，Hangzlwu310031，China) Zhejiang AbstractProteinextractionfromtissueorcellsiSa toachieve in keystep high—resolutionproteinseparation twodimensional routinecellulartotal extractionmethodswere electrophoresis(2一DE)．，Ihteeprote