荧光法研究诺氟沙星和酵母DNA相互作用.pdfVIP

B36 荧光法研究诺氟沙星与酵母DNA相互作用 ‘叶宝芬鞠烧先’ ． (南京大学化学系，配位化学国家重点实验室，南京，210093) 摘要：用荧光和紫外可见光谱法研究了酵母DNA与诺氟沙星间的相互作用．DNA 对诺氟沙星的荧光有强烈的静态猝灭作用．通过研究离子强度的影响和比较诺氟沙 星与单双链DNA紫外光谱的不同，可以认为诺氟沙星扣DNA之间的作用模式是沟 槽作用，其表现键和常数为0．0465腭。ml(15℃)． 关键词：诺氟沙星；DNA；荧光；荧光猝灭 髓着生命科学的发展，研究小分子与DNA的键合选择性与亲和力已引起人们广泛的兴 趣。目前所选用的小分子主要有药物分子lII、配合物脚以及一些荧光染料分子删。研究药物分 子与DNA的相互作用对于预防疾病、提高药效和进行新药筛选与设计等方面都有着重要的指 导意义。诺氟沙星是一种氟喹诺酮类广谱抗菌药。它的药性主要通过抑制DNA促旋酶和阻止 DNA复制来发挥的，因此研究诺氟沙星分子与DNA分子之间的相互作用对于提高诺氟沙星 的体内吸收、抗菌活性和在生物膜间的转运等都有十分重要的意义。本文利用诺氟沙星在紫外 光照射下发射出的特征荧光，研究了诺氟沙星与DNA之间的相互作用，获得了它们之间的键 合常数，使诺氟沙星成为了DNA分析的新荧光探针。 1实验部分 1．1仪器与试剂 生化试剂，uv谱测定A狮／A2帅1．8，于冰箱中0～4C干燥保存。诺氟沙星(Sigma)。 其它试剂均为分析纯，所有实验用水均为二次蒸馏水。 1．2实验方法 ml0．1 在lO叫的比色管中依次加入诺氟沙星溶液、l mg／ml磷酸盐缓冲溶液与适量的1 nm， mg／mlDNA溶液，混合定容。测量体系中诺氟沙星的浓度为1．0x10一M。激发波长为270 测量410nm处的荧光强度。所有测量均在i5±2℃下进行。激发和发射单色器狭缝均为5眦， 发射单色器扫速为500nm／mjn。 2结果与讨论 2．1诺氟沙星与DNA相互作用的荧光光谱 在不同DNA浓度下．诺氟沙星与DNA体系的荧光发射光谱如图1所示。当激发波长为 270 nm时．最大发射波长为410nm。随着DNA浓度的增加，其荧光发射峰位置不变。强度 逐渐减弱，出现了DNA对诺氟沙星的荧光猝灭作用。这种猝灭方式符合Stcrn-Volmet方程： 星猝灭常数大小的比较，由图可以看到，15℃时K为0．0465鹏’1ml，随着温度的升高，猝灭 常数明显减小，说明其间的作用是一种静态猝灭过程。 2．2实验条件对诺氟沙星与DIqA作用的影响 首先考察了离子强度对体系荧光猝灭的影响。随着离子强度的增加，诺氟沙星自身的荧光 略有下降，同时体系的荧光也同步下降，使得整体的猝灭作用和FM没有明显的变化。由于 Na+等盐类阳离子能以静电作用的方式与DNA上的磷酸基团作用，使DNA周围形成—个 埝～ 趁崔∥≯ 公誓 固2．不同温度下DN^对诺氟沙星的Stern．Volmcr 圈1．诺氟沙星荧光放射光谱(从上到下C洲^为0．0， 8血I)． 4．8，9．6，144，192，24．0，28．8，336和38．4州)． 曲线(CoNA；28 阳离子氛，从而强烈减弱物质与DNA之间的静电吸附作用．因此诺氟沙星与DNA之间不 存在静电作用。 7．0的磷酸盐 进一步考察了DNA对诺氟沙星的紫外吸收光谱的影响。诺氟沙星在pn 缓冲溶液中的紫外吸收光谱在270nnl处有最大吸收，在加入DNA前后，它的紫外吸收峰强 与峰位置均没有明显的变化．因此可以认为，诺氟沙星与DNA间没有发生嵌入作用。 物质与DNA间的作用主要有三种方式：1)静电作用：2)小沟漕作用；3)嵌入作用。 排除静电与嵌入两种作用方式，我们认为，诺氟沙星与DNA间存在着小沟漕作用。比较了 诺氟沙星与dsD