猪气管上皮细胞的分离、培养和鉴定.pdfVIP

生堡煦!坠查鳖!E叠盘壶!丛生!Q旦墨丝鲞筮』塑￡鱼』蜿￡画型燮坠强：堕虹垫堂：篁匹墼丛!．j ·实验研究· 猪气管上皮细胞的分离、培养和鉴定 肖开颜周广东刘伟崔磊曹谊林 【摘要】目的探索猪气管上皮细胞体外适宜的生长、增殖条件，以期为组织工程化气管内壁上皮 化提供种子细胞。方法无菌切取猪颈段气管，细菌蛋白酶消化。以明胶作为铺层，接种、培养。待细 胞贴壁后，进行光镜观察、广谱角蛋白免疫组化检测、免疫荧光鉴定。结果光镜观察可见细胞呈铺路 石样生长。角蛋白检测和免疫荧光检测均呈阳性，而阴性对照组和空白对照组呈阴性。结论 以明胶 作为铺层可以培养出活力较好、纯度高的气管上皮细胞。 【关键词】生物假体 上皮细胞 明胶气管 Gmwlh删严删舾伽e耐邢皿嘲吐斯p0旧岫h讷嘲印t口—谢。棚jn订hD皿40缸}y∞。删凸佣乎出W．廿“唰， d“DqⅫ加鲥旷‰衄d船耐油1￡c墙℃‘酽ry，鼎口，劝Ⅱ‘9以踟础!，s‘一‘曲，汹以胍如z￡托哪3Ⅱy，sIrF； 200011．a“加 The w出b 【Ak嘣】o啡Bc晰e s|l】dy pu。P蜥，0f“s 8砷lⅢ℃山e印岬i山印，wI}I，PI曲I啪m…附Ⅲ瑚m缸畔面e曲一 c0LJldbe 曲词印jtIleH缸【枷iⅡ订呐，讹dI8new啪d ceⅡ㈣如nB叫e肿西Jle删tracIl∞印i山eIi呲M酬lo凼f证lneh— clld h删d The epiⅡdi—odkw戢甜酬bv dige蚵明Ⅲd c山- pIot嘲e c11I呲耐oⅡcouB鼎f0丑8cd址jn·1埘。科硝山e k枷n 姐刊tr丑小甜c扎w曲e试叫耐byH曲t眦啪s∞py蛐d血e8印【鹘si帆w够蛐出yzed ㈣IoeR嘲llts 0bser哪ion hy】一啊协‰觚嘶md岫叫】0nu一 1k唧hd晒c日l c∞6Ⅱned血e‘yplc山“臼b咖．1illgi叩of印i小ehd锄B0山k町f访iⅡm啪ocrb— cll匝dg时mm o如dII妇Ttle jm咖埘胡uo陀9c朗ce唧。圆萄肌髓6p商tIve，锄dtk。掣髓*帆mM趴k。0曲m目龇pw踮”唧Ⅱve a词鼬l刊dh cllltu舯∞哦帅珥avide c山嘶Dg曲che出印i廿Ielidcdls，cdl岬硒l(甜出nm掣一町8hpon如tmk加epi出elid ceUdnadⅡⅫ． H odhGe】min 【K封哪r幽】m1㈣}IeEpiⅡ曲d 1hclIea 材料和方法 组织工程技术构建组织的最终目标是要求构建 出的组织不仅具有形态，而且应具备所需要的生物 实验动物为2个月龄长枫杂交猪，体重lo～15 学功能。在以往的实验研究中我们已成功地在裸鼠 妇，雌雄不限。 皮下构建出具有一定支撑功能的“组织工程化气 将动物常规麻醉，无菌切取3—9环气管，置于 管”，其在大体外观和组织学结构上均和自体正常气 装有30d磷酸盐缓冲液(PBs，含钾、等渗、pH7．4) 管极近相似。而气管的另一重要的生物学功能是有 的离心管中。 赖于气管内壁的纤毛柱状上皮完成的清除气道分泌 将标本迅速送至细胞培养室中，阳s清洗3遍， 物。为此，我们尝试体外培养猪的气管内纤毛柱状 加入O．5％的细菌蛋白酶(美国si舯a公司)约20 上皮细胞(AEc)，并通过光境、免疫组