茎用芥菜细胞质雄性不育系与其保持系SPOROCYTELESS基因的研究.pdfVIP

416园艺学进展(第七辑 茎用芥菜细胞质雄性不育系及其保持系 SPOROCYTELESS基因的研究 杨景华张明方。 喻景权陈竹君 (浙江大学农业与生物技术园艺系园艺植物生长发育与生物 技术农业部重点实验室，杭州310029) 推定编码331个氨基酸，为一亲水性的转录因子蛋白，推导的氨基酸序列与拟南芥sPL／ NZZ基因的保守性为69％。SPL基因在茎用芥菜可育系前期和中期发育的花蕾中表达，而不 育系花蕾的发育前期仅有极少量表达，花蕾发育中期和后期就有表达。 关键词：茎用芥菜；细胞质雄性不育，SPORCL-YTELESs；小孢子发育 雄性不育是植物中比较普遍的遗传现象，在作物杂种优势利用中有着重要应用价值。利用雄性不育 既可以省去人工去雄的手续，又可以保证杂交一代种子的纯度，同时它又是研究花粉发育、细胞质遗传 关雄性不育机理以及雄性不育系利用的研究已经有了长足的进展。 十字花科作物存在着明显的杂种优势，目前杂种一代的生产主要是利用自交不亲和性和雄性不育性 两种途径。迄今为止，十字花科作物中许多重要的经济作物，如白菜[10,11]、甘蓝oz]，榨菜o“，甘蓝型 度和不育率的材料，因此，在十字花科作物优势育种利用中有着更广阔的前景。 。芥菜是中国的特产蔬菜，在浙江和四川等地有着广泛的栽培，自交亲和指数非常高，生产上存在病 毒病严重和品质下降等问题，而杂种优势的利用可以改良现有芥菜品种的品质及提高抗性。陈竹君、张 明方等。日通过远缘杂交和回交的方法选育了综合经济性状优良的茎用芥菜细胞质雄性不育系(CMS SPOROCⅥ甚LESS(SPL)，并对该基因的分子特性进行了研究。 1材料和方法 1．1材料 以茎用芥菜细胞质雄性不育及其保持系为材料进行比较研究，茎用芥菜不育系为高代饱和回交，保 持系为其相应的高代自交系，因此，不育系与保持系为近等基因系。 1．2总RNA的提取 收稿日期：2006—01一10；修回臼期：2006—05—12。 *通讯作者：ndzhang@巧u．edu．cn。 蔬菜417 1．3 eDNA第一条链的合成 eDNA第一条链，具体操作参照Toyobo公司eDNA第一条链合成试剂盒方法。 1．4 RT-PCR殛RACE 根据拟南芥(SPL／NZ劢基因设计中间片断引物，PCR方法克隆中间片段，然后分别采用3，一 分析。 1．5表达分析 提取茎用芥菜细胞质雄性不育系及其保持系不同发育时期的花蕾总RNA，反转录成eDNA，方法 同1．2，RT-PCR方法分析茎用芥菜SPL基因的表达情况。 2结果与分析 2．1 SPL基因的克隆及特性分析 1594 (图1)，生物信息学特性分析表明该基因编码一核定位(KKKR，核定位信号肽)的亲水性(图2)蛋 图1茎用芥菜SPL基因与拟南芥SPL(NZZ)基因的同源性分析 图2茎用芥菜SPL基因的疏水性分析 图3茎用芥菜sPL基因的MADS转录因子特性分析 418园艺学进展(第七辑 白质，同时该基因具有典型的MADS 型转录因子的结构域(氨基酸位置从 62至78)(图3)。同时具有推定的蛋 白激酶c的磷酸化位点、酪蛋白激酶 磷酸化位点及糖基化位点等表明该基 因可能受笆量曼墅塑竽。 图4茎用芥菜SPL基因在细胞质雄性不育系及其 2·2 sPL基因的表达+ …‘森藉釜磊营发1再品嚣茹一……～一 采用RT-PCR方法分析SPL基因 在茎用芥菜细胞质雄性不育系及其保持系的表达情况，表明茎用芥菜SPL基因在保持系花蕾发育的前期 及中期表达，而在细胞质雄性不育系的前期有极少量的表达，随着花蕾的发育该基因没有表达(图4)。 3讨论 因子的载体。对植物线粒体基因组的深入研究表明，高等植物线粒体基因组含有正向或反向的重复序 列，功能基因如果位于重复序列的边缘，就有可能在重组时受到影响而引起基因结构的变化，从而影响 et et et 到其功能口7“”(Hanson a