农杆菌介导的双价抗盐基因转化番茄地研究.pdfVIP

覆建妻n 第三届尊洋生物高技术抡坛 200s．08．19-23 农杆菌介导的双价抗盐基因转化番茄的研究+ 刘晶1,2，周树峰1，陈华1，韩和平1，李银心1+ (’中国科学院植物研究所光合作用与环境分子生理学重点实验室，北京，100093； 2中国科学院研究生院，北京，100039) 摘要：运用农杆菌介导法向转AtNHXl(拟南芥Na+／H十逆向运输蛋白编码基因)的番茄 esculentum (Lycopersicum 已经整合到番茄基因组，并在转基因植株中转录和翻译表达。叶绿素荧光(Fv，Fm)、相对电 明，200mMNaCI胁迫下，双转化的番茄植株各项生理指标均优于单转4J6AtNHXl的番茄。 初步证明“双基因转化”有助于增强番茄的耐盐性。同时对番茄的转化系统进行了优化，结果 表明使用抗生素‘特美汀’的转化效率明显高于头孢霉素。 关键词：农杆菌；BADH；AtNHXl；双基因转化；耐盐性 十壤盐渍化是影响农业生产和生态环境的严重问题。在人口不断增加，耕地日趋减少和 淡水资源不足的严重压力卜．，如何利用大面积的盐碱地、荒漠化士地和丰富的咸水资源发展 农业，己成为生物科学迫切需要解决的重火课题【1】。而提高作物的耐盐性是开发利用盐碱地 最根本、最经济和最有效的方法【2】o 植物的耐盐机理十分复杂，包括形态适应、碳代谢途径的改变、渗透调节、活性氧的清 除以及盐胁迫蛋白等等。而在高渗条件-卜．，盐生植物主要通过渗透调=】}了的方式来降低盐胁迫。 植物渗透凋。仃的方式主要有两种：一是在细胞中吸收和积累无机盐，如通过离子通道、Na+／H。 逆向运输蛋白和ATP酶／H+泵：二是在细胞中合成有机溶质，如脯氨酸和甘氨酸甜菜碱。 BADH是甜菜碱合成途径中的两个关键酶之一，其催化产物甜菜碱是一种很重要的渗透 凋’竹物质，其在细胞中的积累有利丁调=悔细胞的渗透压，还有助于保护抗氧化酶系统。从山 菠菜中克隆的BADH基冈已被转入烟草【3】、水稻f4】、小型51、豆瓣菜【6】、番茄‘71等重要农作物 中，增强了这些植物的耐盐性。Jia[71等将山菠菜BADH基因导入了番茄，获得的转基因植株 mM 能在含120 NaC!的环境中止常生长=，并且在T1代保持稳定。离子逆向转运蛋白Na+／H+ antiporter能够逆着Na+浓度梯度运输，将细胞内过高浓度的有害离子排除，或在液泡中区隔 mM NaCI胁迫下生长、开花和结实，耐盐性得到 ‘Moneymaker’裔茄，转基冈甭茄能在200 显著提高嘲。 植物的耐盐性是一个多基因控制的复杂性状，将两个甚至多个耐盐相关基因转入到同一 +国家“863”计划资助课题(编‘吁：2003AA627010) +通讯作者。E-mail：vxli@ibcas．ac．cn 581 接建覆仃 第三届海洋生物高技术论坛 2005．08．19-23 个植物(即所谓的“复合基冈转化’’)将会大大提高转基因植物的耐盐能力f9，10】。我们通过农 esculentum (Lycopersicum 基冈导入进一步提高转基因番茄植株的耐盐性。 1材料和方法 1．1材料 人多伦多火学植物系EduardoBlumwald教授惠赠，外源基因在番茄中已稳定遗传。本研究中 外植体。得剑的转双基因再生植株标记为TT0，不同株系标记为TTO．1，TT0。2，依此类推。 1．1．2菌株、质粒和抗生素质粒pBin438、农杆菌菌株(Agrobacterium Beecham 射用替k眄林钠一克拉维酸钾)，制造商：SmithKline 京人学第三附属医院：头孢霉素购白鼎国生物公司，编号为DH050．1。 RB LB