三聚氰胺及其和三聚氰酸联合对雄性小鼠睾丸的毒性作用研究.pdfVIP

三聚氰胺及其与三聚氰酸联合对雄性小鼠睾丸的毒性作用研究 尹荣焕1王心竹1白文林1刘娇1尹荣兰2 高维凡1何剑斌1 1.沈阳农业大学畜牧兽医学院，辽宁沈阳1101612.吉林省畜牧兽医科学研究院，吉林长春，130002 摘要：为了探讨三聚氰胺及其同系物三聚氰酸对小鼠生殖系统的毒性，试验采用TUNEL法和透射电镜技 术检测了三聚氰胺及其与三聚氰酸联合应用对小鼠睾丸结构及生精细胞凋亡的损伤作用，结果表明：三聚 氰胺单独及其与三聚氰酸联合攻毒均能诱导小鼠睾丸生精细胞发生凋亡，同时还可以使睾丸组织出现部分 生精细胞分层不明显，结构松散，严重者细胞核肿大、溶解，生精细胞核膜模糊，胞质溶解，粗面内质网 扩张等病理损伤现象。 关键词：三聚氰胺;三聚氰酸;睾丸;毒性;生精细胞凋亡 第十二届学术研讨会 105 1．4病理组织学检查 取小鼠睾丸放入10％的中性福尔马林溶液固定12 h以上，再经脱水、浸蜡、包埋、切片和HE染色等 处理，光镜观察。 1．S电子显微铳观察 将睾丸切成小块用2．5％戊二醛溶液固定，乙醇脱水，环氧树脂包埋，超薄切片，醋酸铀及柠檬酸铅 染色，透射电镜观察。 1．611眦L法检测生精细胞捆亡 小鼠睾丸组织用4％多聚甲醛溶液固定4小时以上，多聚赖氨酸处理玻片，常规方法石蜡包埋，脱蜡入 水，生精细胞凋亡检测按照1rI烈EI祛试剂盒说明书进行操作。每张切片在标记良好的区域任取20+视野， index，舢)。 计数总生精细胞中凋亡细胞数，计算出阳性细胞率，作为生精细胞凋亡指数(apoptotic 1．7数据统计分析 本试验的数据采用SPSSl6．0统计软件中单因子方差分析进行统计分析，文中所有试验数据均用平均 值±标准误表示。 2结果与分析 2．1染毒小鼠的临床及大体解剖观察 临床观察对照组及三聚氰胺中、低剂量组采食饮水正常，三聚氰胺高剂量组及其它试验组采食量减少， 反应迟顿，尤其混合高剂量组小鼠被毛无光泽，生长缓慢。实验结束时对所有动物进行解剖，观察睾丸的解 剖学变化，各试验组未见明显异常。 2．2搴丸病理组织学观察结果 在光镜下观察小鼠睾丸组织切片(图略)。三聚氰胺低剂量组曲精小管上皮细胞基本能保持完整，各 级生精细胞清晰可辨；中剂量组个别初级精母细胞、次级精母细胞和精子细胞细胞核形态不规则；高剂量 组曲精小管上皮细胞层数明显减少，层次不清，各级生精细胞的结构有所破坏，有些曲精小管支持细胞上 嵌附的精子数量减少或看不到成熟的精子细胞。混合低剂量组曲精小管各级生精细胞的层数基本正常，部 分核形态排列不规划；混合中剂量组和高剂量组生精细胞分层已不明显，层数减少，结构松散，有些细胞 核肿大、溶解，染色不均，部分曲精小管成熟精子数量减少。 2．3小鼠皋丸超徽结构的变化 透射电镜观察结果显示，正常组和低剂量组小鼠睾丸间质细胞和各级生精细胞均未观察到显著异常， 中剂量组三聚氰胺可以见到部分间质细胞核形态异常、核内异染色质有边集现象，精原细胞和初级精母细 胞可以见到粗面内质网轻度扩张。高浓度三聚氰胺组见图l，可见到间质细胞核形态不规则，核内异染色 质有边集现象。精原细胞、初级和次级精母细胞部分核膜模糊，胞质有溶解，粗面内质网扩张。有些精子 细胞也可以看到粗面内质网扩张。 混合攻毒组低剂量组和中剂量组均可以观察到间质细胞核形态有不规则现象．个别细胞核内异染色质 边集，除此之外，中剂量组精原细胞和初级精母细胞还可见核膜部分模糊，胞质有溶解现象。高剂量组病 106 第十二届学术研讨会 理损害较为明显，如见图1：问质细胞细胞核形态极不规则，核内异染色质有边集现象，胞质内有较多的 脂滴。各级生精细胞均可见到核膜模糊，胞质部分溶解。 图1小鼠睾丸超徽结构的变化(5000×)．-核形态不规则，核内异染色质边集一宽白箭头，细胞胞质内有较多的脂清一长白 细箭头，细胞深染、核膜部分模糊或水肿一宽黑箭头，胞质有溶解一长黑细箭头，粗面内质网扩张一三角白箭头，核膜模糊 或溶解一宽黑箭头，溶酶体一三角黑箭头三聚氰胺高剂量组：A．睾丸间质细胞，B．精原细胞，C．初级精母细胞，D．精子细 胞三聚氰胺和三聚