实验二、大鼠在体小肠吸收.docVIP

实验二、大鼠在体小肠吸收 一、实验目的 1.掌握大鼠在体吸收的实验方法 2.掌握药物吸收速度常数（K），半衰期t1/2，以及每小时吸收率的计算方法。 二、实验原理 被动扩散是消化管吸收的最重要途径，是指药物分子通过胃肠屏障从浓度高的区域（吸收部位） (1) 式中为分子型药物的透过速度；S为膜的面积；D为膜内的扩散速度常数；K0为膜物质/水溶液的分配系数；C为消化液中药物浓度（外部浓度）；Cb为在血液中药物浓度（内部浓度）；X为膜的厚度。P=DK0称为透过常数。 一般药物进入循环系统后，立即转运至全身，故药物在吸收部位循环液中的浓度相当低，可忽略不计。因此透过速度与消化液中的药物浓度成正比，若设PS/X=K，则(1)式可以简化为： (2) 由(2)式可以看出药物的透过速度属于表现一级速度过程。若以消化液中药物量的变化dx/dt表示透过速度，则 (3) 将(3)式积分 LnX=LnXc-Kt (4) 以小肠内残留的LnX对时间作图应为一条直线，其直线斜率即为药物在小肠中的吸收速度常数K。 三、仪器与材料 1.实验仪器 蠕动泵1台，752分光光度计1台，磁力搅拌水浴锅加转子，红外灯一只，铁架台1只，固定板/手术托盘1个，烘箱，天平，手术剪1只，止血钳1只，镊子，乳胶管，棉花，手术线，纱布，坐标纸 量筒1000ml 1个，烧杯1000ml 1个，烧杯250ml 1个，容量瓶1000ml 1个，100ml 1个，10ml 6个，注射器5ml 1个，移液管10ml 1个，1ml 1个 2.实验试剂 法莫替丁，酚红，乌拉坦（20%，大鼠每200g腹腔注射1.2ml麻醉），生理盐水，1mol/L NaOH溶液，Korbs-Ringer试液（每1000ml内含NaCl 7.8g，CaCl2 0.37g，NaHCO3 1.37g，NaH2PO4 0.32g，MgCl2 0.02g，葡萄糖1.4g），乙醚 四、实验内容 1.操作 取100ml供试液（100ml Krobs-Ringer试液含法莫替丁10mg、酚红2mg）加入循环装置的烧瓶中，将实验前禁食一夜，体重200g左右的雄性大鼠（称重）乙醚初步麻醉后，腹腔注射乌拉坦1.2ml麻醉。将大鼠在固定板上固定，沿腹中线打开腹腔（约3cm长），自十二指肠上部及回肠下部各插入一根蠕动泵上的乳胶管，用线扎紧，并用37℃的生理盐水将小肠内容物冲洗干净。开动蠕动泵，将5ml/min的流速循环10min后调速至2.5ml/ml，自烧瓶中取样4ml（0.5ml用于酚红含量测定，剩余的用于法莫替丁含量测定）为药物和酚红零时间样品，并补加4ml酚红溶液（每ml Krobs-Ringer试液含酚红20μg）其后分别于0.5、1、2、3、4h取样（0.5ml用于酚红含量测定，剩余的用于法莫替丁含量测定），同时补加酚红溶液。由于酚红不被小肠吸收，用来测定水被小肠吸收的量。试验结束后，取出小肠，冲洗后剖开，摊于坐标纸上，沿小肠边剪下坐标纸。冲洗后晾干，烘干称重。剪取10格（10cm2）坐标纸称重后，即求得小肠的面积（cm2）。 2.定量方法 （1）法莫替丁定量 药物浓度的测定：法莫替丁的最大吸收波长284nm处酚红也有吸收。为了消除酚红的影响，采用双波长等吸收消去法测定肠循环液中法莫替丁的含量。由于284nm与265nm为酚红的等吸收波长，故选择两波长进行测定。 取大鼠在体肠循环液不同时间点的样品，分别于284和265nm波长处测定吸光度A1和A2，△A=A1-A2。 法莫替丁的比色空白液为Korbs-Ringer试液。 （2）酚红定量 样品0.5ml，加入1mol/L NaOH溶液5ml，于557nm测定吸光度。 酚红的比色空白液为1mol/L NaOH溶液。 3.标准曲线的制备 （1）酚红的标准曲线 精密称取酚红100mg，置1000ml容量瓶内，加Korbs-Ringer试液稀释至刻度，成100微克/毫升的标准溶液，取1，2，3，4，5，6ml于10ml容量瓶中，加Korbs-Ringer试液至刻度。自上述各溶液中吸取0.5ml，按酚红的定量方法测定吸收度，并绘制标准曲线。 （2）法莫替丁的标准曲线 贮备液的配制：精密称取法莫替丁标准品10mg，置100ml容量瓶中，以Korbs-Ringer试液溶解并稀释至刻度，使成100μg /ml的标准溶液。 标准曲线制备：取上述贮备液适量，稀释至50μg /ml的工作液，分别吸取0.5，1，