平板扩散法粗略确定碱性脂肪酶的活性.pdfVIP

维普资讯 荨 l9卷第 2期 无 锡 轻 I 大 学 学 报 V0】19．No2 2000￡3月 JournalofWuxiUniversityofLightIndustry M 8r ．2000 文章编号：1009—038X2《000】02—0168—05 平板扩散法粗略确定碱性脂肪酶的活性 一 1 引、崇荣 ， 邬显章 L，／ ． 叠丝 (1 复旦大学生物化学系．上海 200433 2 无锡轻工大学 中央研究所，江苏无锡 214036) 摘要：通过对圆弧青霉PG37所产碱性脂肪酶活性测定方法的研究和比较，建立 了一种快速、直观、 灵敏的固体琼脂平板脂肪酶活性测定方法．利用脂肪酶在一定条件下分解三丁酸甘 油酯所释放出 的游离脂肪酸使指示剂(维多利亚蓝)变色的原理，根据变色圈直径的大小对酶活性进行粗略分 析，特别适合于酶提纯过程 中大社量样品酶活性的估测以及酶活性条带和其它蛋 白质条带的区 分 4；0q-叶 t中 关键词 ：碱性脂肪酶；平板测定法；妥色圈；聚丙烯酰胺艋胶电泳 中图分类号 ：Q556 文献标识码 ：A DiffusionPlateAssayforQuickandRoughEstimation ofAlkalineLipaseActivity WU Min—chen ．SUN Gang—rong．WU Xtanzhang (1 Department。fBiochemistry，FudanUniversity．Shanghai200433；2 (~ntralResearchInstitute，WuxiUniversityof LightIndustry，Wuxi214036) Abstract：Basedonstudiesandcomparisonamongtheassayo{theactivityofalkalinelipaseproduced byPenicillium cycIopium PG37．arapid，directandsensitivesolidagarplatemethodfortheassayof theactivityofalkalinelipasewasdeveloped Theunderlying principleemployed in thismethodWaS basedoncolourchangeoftheindicator(VictoriaBlue)causedbyfreefattyacidsliberatedfrom tribu— tyrinunderproperconditions Iipaseactivity％vananalyzedquicklyandriughlyaccordingtothediame— tersofthehalos Themethodspeciallyfittedfortheassayoftheactivityoflipasesinlargeseriesof samplescollectedinenzymepurificationandthedifferentiationofactivitybandsofproteinsandother bandsofproteins． Keywords：alkalinelipase；platemethod；cOlourhalo；gelelectrophoresis 脂肪酶的测定方法很多：酸碱滴定法…，电位 析法： 这些测定方法步骤烦琐，不适合于大批量 滴定法 1，浊度测定法 ，甘油测定法 和色谱分 样品的快速测定 为了简化测定过程，许多研究者 收稿 日期：1999—05—05i修订 日期：1999—11—24 基金项 目：目家 “九五”科技攻美项 目