平喘Ⅰ号对哮喘鼠气道重塑ERK信号转导与干预.pdfVIP

实验研究 平喘I号对哮喘鼠气道重塑ERK信号转导的干预1 杨季国2马慧娟徐樱沈聪玲李鹏飞徐王燕申琳雅 (浙江中医药大学附属第三医院，浙江杭州310053) 摘要 目的观察支气管哮喘模型鼠在平喘I号干预下不同时期细胞外信号调 节激酶(extracellularregulatedprotein 化，探讨其防治支气管哮喘气道重塑的作用及其作用机制。方法复制小鼠哮喘模 型，随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、平喘I号低、中、高剂量组 6组，各组包括2周、4周、6周组。采用呼吸道合胞病毒(RSV)致敏和激发复制哮 time 喘模型。实时定量一聚合酶链反应(Real PCR)测定肺组织中c—fosmRNA含量， 免疫印迹法(westernblotting)测定肺组织中ERKl表达水平。结果模型对照组 干预组显著降低，平喘I号高剂量4周及6周组优于地塞米松组(尺O．05)。结论ERK 信号转导途径在支气管哮喘气道重塑中起重要作用。平喘I号可能通过调控ERK信 号通路相关因子，缓解气道重塑，改善呼吸道症状。 关键词哮喘；气道重塑；平喘I号；细胞外信号调节激酶；c．fos 支气管哮喘(Asthma)简称哮喘，其主要病理特征是多种炎性细胞(嗜酸性粒细胞、肥大细 胞和T淋巴细胞)、气道结构细胞及细胞因子参与的非特异性慢性炎症性疾病。以反复发作的可 逆性气流受限、气道高反应性及气道重塑为特征“1。研究表明，气道重塑的发生与丝裂原活化 activatedkinase， 蛋白激酶(mitogen protein MAPK)的异常信号转导有关，细胞外信号调 节激酶(extrace儿ularregulatedprotein 是其下游的靶基因，与哮喘气道平滑肌细胞的增殖密切相关，从而导致气道重塑。平喘I号是杨 季国教授经过多年临床实践证明有良效的经验方，前期研究结果显示平喘I号可明显减轻气道炎 症反应，本文研究观察ERKl及下游c—fos蛋白的表达，探讨平喘I号通过ERK信号转导途径干 预哮喘气道重塑的作用。 l材料与方法 药大学动物实验中心提供。福尔马林灭活的呼吸道合胞病毒(FI—RSV)，由浙江中医药大学生命 eruz公司；EcL 科学院提供。鼠抗人GAPDH单克隆抗体、鼠抗人ERKl单克隆抗体，美国santa 显色试剂盒，北京中杉金桥生物技术有限公司；组织裂解液，江苏碧云天生物试剂公司；M—MLV PRIsM 7000实时定量PcR仪，美国ABI公司；电泳仪，美 逆转录酶，美国Promega公司；ABI 国BIO—RAD公司。 1．2平喘I号及致敏液的制备平喘I号由旋复花、代赭石、葶苈子、白芥子、苏子、炒黄 芩、竹沥半夏、地龙、杠板归组成。上述中药浸泡2小时，文火煮30分钟，水煎液浓缩成6．259／ml 的药汁。参考文献心。制备致敏液， 取5％硫酸铝溶液250ml，在强烈搅拌下加入5％氢氧化钠 的氢氧化铝溶液按1：1的比例混合，配置成致敏液，用前即使配置。激发液为FI—RsV。 1．3动物分组及哮喘模型建立将小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、地塞米松组、平 喘I号低、中、高剂量组，每组30只，其中各组包括2周、4周、6周组各10只。除正常对照 组外分别于第l、8天给其余各组小鼠腹腔注射0．1ml致敏液，第8天重复注射致敏液两个小时 后，平喘I号低、中、高计量组分别以109／kg／d、50g／kg／d、100g／kg／d的浓度药液灌胃，地 塞米松组给予0．75mg／kg／d灌胃，正常对照组和模型对照组用等量蒸馏水对照处理。各组小鼠分 1本文受浙江省自然科学基金资助(项目编号：LYl2H27011) 2通讯作者，工作单位：浙江中医药大学附属第三医院；E—mial：yjgha@126．com 358 中华中医药学会儿科分会第30次学术大会论文汇编 u 别于第14、28、42天给药2小时后，用0．2％戊巴比妥0．5m1腹腔麻醉后，每