广东茶树种质资源遗传多样性AFLP分析.pdfVIP

摘 要 物。近年来分子标记等分子生物技术在茶树领域中的研究，取得了一定进展。AFLP技术 是90年代兴起的一种分子标记，以其稳定性好、重复性高、覆盖面广、多态检出率高等 优点被迅速且广泛地运用于生命科学的各领域中。本研究采用AFLP技术对25个广东地方 茶树群体品种和5个对照品种进行遗传多样性分析和种质鉴别研究，并对乐昌白毛茶群 体内各单株的遗传多样性进行分析。主要研究结果如下： 1、采用氯仿：异戊醇一次抽提法提取茶树基因组DNA，再经纯化，获得用于AFLP 对分子量≥23kb，且能被EcoRI酶解完全，并能获得清晰PCR图谱和AFLP指纹图谱。 此DNA提取方法快速、高效、经济，提取的DNA质量好，特别对样品数量多、工作量大 等情况下的研究尤为适用。 2、用AFLP技术对25个广东茶树群体品种和5个对照品种进行遗传多样性分析，获得 清晰可见的DNA指纹图谱。结果表明，5对引物共扩增出401条带，平均每对引物扩增 个茶树群体品种之间遗传相似性以清凉山茶和清远笔架茶最高(O．87248)，桂北大叶种和 2752)，桂北大 风凰水仙之间最低(O．50000)，清凉山茶和清远笔架茶遗传距离最小(0．1 叶种和风凰水仙之间的遗传距离最大(0．50000)。本实验结果表明广东茶树群体品种遗传 多样性十分丰富。采用DPS2000软件中的uPGMA法，对实验数据进行聚类分析，得到 AFLP聚类图。在遗传距离为O．40处取一结合线，可以将30个茶树品种分为3大类，分别 是：第一类包括凤凰水仙、石古坪乌龙、南昆山白毛茶、连南大叶、丰顺马图茶、东源山 菀茶、清凉山茶、清远笔架茶、五华天竺山茶、广州小叶青心、阳春白毛茶、高州白心、 惠阳小叶、罗定小叶、普宁小叶、云南大叶、海南大叶、广州青桂大叶、兴宁官田茶、乐 昌苦茶；第二类类包括乐昌白毛茶、仁化白毛茶、乳源白毛茶、台山白云茶、凌云白毛茶、 广州小叶白心、广宁大叶青心、平远锅了茶；第三类包括桂北大叶和江西宁州种两个茶树 品种。从聚类结果可以看出，广东地方群体品种亲缘关系的多元性和相对集中性。 3、利用5对引物对乐昌白毛茶各单株和5个对照品种进行AFLP分析，获得清晰可见 的DNA指纹图谱。共扩增出345条带，平均每对引物扩增69条带，多态性条带257条， 占总带数的74．5％。扩增片段大小在50～580bp之间。本实验结果表明乐昌白毛茶品种内 遗传多样性比较丰富，但品种内的多态性条带低于品种间(8413％)。17个样本的遗传距离 分析表明，以4号单株和1号单株的遗传距离最大(O．60129)，桂北大叶种和江西宁州种 的遗传距离最小(O．17647)。从聚类图上可以看出，在遗传距离为O．54处取一结合线，可 以将17个样本分为3大类，3号单株和4号单株单独分开聚类，5个对照品种与其他单株 聚为一大类，这一结果显示了乐昌白毛茶品种内遗传的多样性和复杂性。 4、用AFLP技术对30个茶树种质资源进行品种鉴别分析，结果显示，选用的5对引 物中有3对引物对30个供试材料的鉴别率均是100％，另外2对引物的鉴别率是98％。仅 以一条特异标记带的差别就可以区分23个品种，其余品种也可以通过2条或3条特征性 条带区分开来。此结果表明AFLP是～种高效的分子标记技术。 关键词：茶树；分子标记；遗传多样性；AFLP lI Abstract to Tea china，ithadbeen spread plant[∞聊e盯胁sfnP坨s括(L．)O．K删zP】ori百nated舶m inthe、vorld．Theresearches countriesandbec姗eme economic