一株Clostridium属厌氧菌的分子鉴定与产氢特性.pdfVIP

第27卷第2期 v01．27．N02 20嘶年2月 陆．2006 李永峰1，任南琪1，杨传平2，李建政1，王兴祖1，李鹏1 (1．哈尔滨工业大学市政环境学院，喑尔滨150090；2．东北林业大学林业资源与环境学院．哈尔滨150024) 测定其产氢昔和细菌牛长的结果表明，菌株№衄anqil邶3在葡萄糖浓度为12．59，L时具有最大的细胞生长量和比产 气率，分别为o 产氢率分别为00710D600肿和o．10nd评，mol—ucose。 关键词：生物制氢；产氢细菌；分离纯化；16剐)NA测序；产氢特性 中图分类号：1x6．田819文献标识码：A o 前‘言 L2囊嚣te滚管法、厌氧管斜面法、平皿 生物制氢技术利用高浓度有机废水或其它生物 夹层厌氧法和平板培养瓶厌氧法”1。 质制取氢气，反应条件温和，具有开发新能源、节省 1．3 16srDNA扩增与测序 能量消耗及净化环境的多重意义。利用高浓度有机 正向引物BsF8／加：5’．AG 废水进行生物制氢，实质是产氢产酸发酵细菌降解 有机物质释放出H：。因此分离鉴定高效产氢细菌 G耵1℃A c1TIC．3’。测序由上海博亚生物技术有限公 是解决发酵法生物制氢产业化工程菌的重要课题。 ‰ish0，Y等“。首先进行产氢发酵细菌的研究，国内 外学者为此付出了艰苦的努力n一。但是仅仅局限 于一些菌种上，遗传基础狭窄，还不能进行生产的实 际利用…。为分离鉴定高效产氢细菌的新种质和新 物种，我们开展了分离鉴定产氢细菌及其产氢性能 的研究，以期获得在生产上的应用。 l材料与方法 糖电泳回收检测。 1．1菌株分离与培养 1．4国际数据库注册 从生物制氢反应器中取lOrnL产氢发酵活性污 泥，放人无氧灭菌的装有多粒玻璃珠的培养瓶中，在 Bmk进行序列比较分析，并注册国际生物信息学数 振荡器中振荡1h或手工摇瓶30min将菌胶团打碎。 据库GenBank。 用脱氧无菌水或脱氧无菌生理盐水10倍梯度稀释， 1．5理化指标分析 接种于固体培养基中或平板培养或制成滚管培养。 试验体系中氢气产量、葡萄糖含量、菌浊0D值 培养时间为20d。采用LM．1培养基”1和HPB．LJR培 与于重的测定方法和装置见文献[2】。 养基”J。培养基高压灭菌115℃，30111in，35℃条件下 和转速120聊的空气浴摇床中培养。 收稿日期：20㈣．05 基盒项目：国家杰出青年科学基金(50l笛823)；目家973重点 25 项目(∞0000264垃)；哈工大基金(唧．^玎)2002 万方数据万方数据 2期 李永峰等：一株a训di啪属厌氧菌的分子鉴定与产氢特性 2结果与讨论 2．1 a憾l嘛喃Ⅻ厌氧菌的分离与筛选 利用“固相一液相一固相”培养基中的循环培养 分离纯化产氢细菌，一般进行5次左右的重复操作 即可获得纯菌菌落。用uⅥ．1培养基作为分离培养 的起始富集培养基。用m，B．LR培养基纯化培养产 氢细菌。共分离到90余株产氢细菌，将其中的l株 命名为R—mnqilyB3(以下简写为R33)。 菌株R33为革兰氏阳性，杆菌，长度为1．5— 2．Opm，宽度O，3～O．5岬，菌体周生鞭毛，鞭毛较长， 有芽孢，形成的菌落呈现白色或乳白色，20～30d可 图l菌株R。。岬驴3的透射电镜照片(30000x) 长成至直径为1．0—2．5Ⅱ蚰，菌落边缘整齐，圆形，光 0f蚰．m髓(300∞K)