一株产表面活性剂的高效烃降解菌的筛选.pdfVIP

第 22卷 第 1期 广东石油化工学院学报 V01．22 No．1 2012年 2月 JournalofGuangdongUniversityofPetrochemicalTechnology Feb．20l2 一 株产表面活性剂的高效烃降解茵的筛选 马飞 ，潘科 ，陶文 ，马莉莎 ，郭峰 (1．长江大学 油气资源与勘探技术教育部重点实验室，湖北 荆州434023；2．长江大学地球化学系，湖北 荆州434023； 3．中国石油吐哈油田分公司，新疆 吐鲁番 838000；4．中国石油青海油田分公司勘探开发研究院，甘肃 敦煌 736200) 摘要：以大庆油田污染土壤为对象 ，通过血平板、油平板、摇瓶发酵筛选出了1株高效烃降解菌 。原油摇瓶发酵实验表明 原油的降解率为57％。该菌株能够产生大量的活性物质 ，经傅里叶红外光谱分析表明其产生的生物活性物质为脂肽类化 合物，该脂肽类生物表面活性剂理化性质显示它能使发酵液的表面张力从56．1mN／m(CK)降低为32．3mN／m。排油实验、油 水乳化稳定性测定表明该菌产生的表面活性剂能具有较强的乳化原油的能力，展现了较大的应用潜力。 关键词：烃降解菌；生物修复；烃降解率；生物表面活性剂 中图分类号：X172 文献标识码：A 文章编号：2095—2562(2012)01—0022—04 随着石油工业的发展，土壤遭到了石油烃类物质广泛且严重的污染，这对当地的土壤生态环境、居民 生产生活及健康、经济的可持续发展都造成了严重危害。微生物修复技术因其经济、高效、安全、无二次污 染等优点，已成为治理石油污染土壤一项重要、有效的技术手段。 微生物表面活性剂能有效的提高石油烃的生物可利用性，从而大大促进微生物对石油烃的降解效 率_1]，而且比化学合成的表面活性剂更高效 、具有更多优点，因此将其用于强化石油污染土壤的生物修 复越来越受到国内外广泛的关注青睐。我们从石油污染土壤中筛选出既能降解石油，又能产表面活性剂 的细菌，这种集降解能力和产表面活性剂的能力于一体的细菌能更有效地降解石油，为生物修复石油污染 打下 了基础 。 1 材料与方法 1．1 菌种来源 本实验室从大庆油田原油污染土壤 自行分离。 1．2 培养基配方 无机盐培养基：Mgs047·H2O0．2g，K2Ⅲo41．0g，KH2PO41．0g，NH．NO31．0g，FeS040．05g，CaC120．02 g，水 1000mL，pH7．0～7．2；血平板培养基：牛肉膏 1．5g，蛋 白胨 5g，酵母膏0．05g，氯化钠 2．5g，琼脂 9g，羊 血 5％，蒸馏水 500mL，pH7．0～7．2；油平板培养基 ：无机盐培养基 +18g琼脂 +2g原油；富集培养基 ：无机 盐培养基+2g原油；葡萄糖发酵培养基：无机盐培养基+13g葡萄糖。 实验用油：大庆油田南6—40一丙619井。 1．3 石油烃降解茵的富集和分离 将接人50mL以石油烃为唯一碳源的富集培养基中，置于30℃恒温摇床上 180r／min富集培养7d。移 取第一次富集培养液，按 10％的比例接入新鲜的以石油烃为唯一碳源的培养基中，在相同条件下进行第 二次富集培养，共重复3次，将得到的富集培养液进行梯度稀释，取合适稀释度涂布肉胨平板，置于30~C 收稿 日期：2011—12—14；修 回日期：2011—12—28 作者简介：马飞 (1986一)，女 ，新疆喀什人，在读研究生，研究方向：石油微生物以及环境修复。 第 1期 马飞等：一株产表面活性剂的高效烃降解菌的筛选 23 恒温培养箱中，培养 5d，挑取具有不同菌落形态的单菌落，经纯化后保存于肉胨斜面。 挑取新鲜培养的菌落，分别接种于血平板和原油平板上，培养 1～2d后观察溶血圈的有无以及噬油斑 的有无，获得初筛产表面活性剂菌株。 1．4 发酵液表面张力的测定 采用上海衡平仪器仪表厂生产的BZY—l表面张力仪测定发酵液表面张力。 1．5 乳化性能测定 在刻度试管中加入5mL石蜡和5ⅡlL发酵培养液，用 AS2060B型超声波发生器处理30min，然后在一 定时间内分别测量乳化液和油相的体积，计算乳化指数。 1．6 产物特性分析 取出培养