脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人胃癌细胞SGC-7901、BGC-823凋亡影响.pdf

中文摘要 脱氧雪腐镰刀菌烯醇对体外培养人胃癌细胞 SGC．7901、BGC．823凋亡的影响 摘 目的：恶性肿瘤的治疗是医学界研究的热点和前沿领 域，随着科学技术的飞速发展，肿瘤治疗也取得了较大的 进展，新的治疗药物、方法不断问世，一些毒性物质已经 成功应用于临床肿瘤的治疗，三氧化二砷便是最典型的例 呕毒素，是一种单端孢霉烯族毒素，为雪腐镰刀菌烯醇的 脱氧衍生物，主要由某些镰刀菌产生。研究报道，DON 具有很强的细胞毒性，对于原核细胞、真核细胞、肿瘤细 胞均具有明显的毒性作用，但是，DON的致癌性、致突 变性尚没有统一结论。目前，对于DON的研究多集中在 检测方法、免疫毒理学以及对正常细胞的影响方面，而关 于DON对肿瘤细胞影响的研究国内外均报道甚少。为探 讨DON对肿瘤细胞的可能影响，本研究观察了DON对体 分化)细胞的影响，以期揭示DON对肿瘤细胞生长、凋亡 的作用及其机理，为临床肿瘤治疗的可能应用奠定基础。 方法： l细胞培养 用含10％胎牛血清，105U／L青霉素，100mg／L链霉素 中文摘要 长期的细胞(传代后24h)随机分为对照组和处理组，对 照组加入等体积的生理盐水，处理组分别给予100、500、 DON处理72h，常规消化、离心收集细胞。 1000“g／L 2MTT DON 的影响，选择DON对细胞的处理浓度和处理时间。 3流式细胞定量检测技术(FCM) 检测不同浓度DON处理对细胞凋亡的影响。 4超微结构观察： 应用透射电镜观察细胞凋亡超微结构的改变。 5流式细胞定量检测技术(FCM)、免疫细胞化学和蛋 白免疫印迹(Western Blotting) 胞中Bax、Bcl一2蛋白表达的变化。 结果： 一 1 影响 MTT检测结果表明，DON对胃癌细胞的生长有一定 抑制作用：给予不同剂量DON分别处理不同时间后，均使 SGC．790 1、BGC一823细胞存活率降低，其浓度越高且作用 时间越长，细胞存活率越低。根据MTT检测结果，选择 间。 中文摘要 2 影响 2．1FCM检测细胞凋亡率结果 亡率均高于对照组，其中以1000嵋几DON处理组升高最 浓度升高凋亡率也相应增加，呈明显剂量依赖关系(直线 n=4)。 BGC．823细胞经DON处理72h后，各处理组细胞凋 亡率均较对照组显著升高(PO．05)。且在O到1000耀几浓 度范围内随DON浓度升高凋亡率相应增加，呈明显剂量 7l 依赖关系(直线回归方程为：譬BGc-823=1．974+O．0018X， 严O．750，尸0．01，n=4)。 2．2超微结构观察 l、 透射电镜超微结构观察发现，DON处理组SGC．790 BGC．823部分细胞出现了核膜增厚，染色质边集等凋亡相 关的形态学表现。以上结果提示DON处理可以诱导 SGC一7901、BGC一823细胞发生凋亡。 3凋亡相关蛋白一Bax和Bcl．2的检测 3．1Bax蛋白的检测 3．1．1 FCM定量检测Bax蛋白表达 FCM检测结果显示，经DON处理72h后，与对照组 中文摘要 围内随DON浓度升高Bax表达量亦相应增加，呈明显正 严O．911，P0．01，n=3)。 BGC．823细胞各处理组Bax蛋白表达量均升高明显 (尸0．05)。在O到1 ooOug／L浓度范围内随DON浓度升高 Bax表达量相应增加，呈明显的正相