海绵共附生微生物中具有α-葡萄糖苷酶抑制活性菌株的筛选与初步鉴定.pdfVIP

第3l卷第3期 台 湾 海 峡 V01．31．No．3 2叭2年8月 JOURNAL0F0CEANOGRAPHYINTAIWANSTRAIT Aug．，2012 海绵共附生微生物中具有0(一葡萄糖苷酶 抑制活性菌株的筛选与初步鉴定 查鑫壶1，靳翠丽1’2，陈毓遒1，缪莉1’2…，朱晓雯1，周晓见1’2 (1．扬州大学环境科学与工程学院，江苏扬州225127；2扬州大学海洋科学与技术研究所，江苏扬州225127； 3．上海药物研究所新药研究国家重点实验室，上海201203) 摘要：通过建立仅一葡萄糖苷酶抑制剂筛选模型，对美国圣璜岛海域海绵共附生微生物发酵产物进行 活性筛选．其中，仪．葡萄糖苷酶活性测试反应体系是在96孔酶标板中进行，在Q一葡萄糖苷酶浓度 为0．008 U／cm3，pH值为6．8，反应温度为37cC及测定生成物波长为405nm的基础上，优化筛选模 mmol／dm3、活性测试反应时间为25 型．结果表明，模型的最佳筛选条件：底物PNPG的浓度为10 min，样品溶剂DMsO含量为2％(∥y)．以d一葡萄糖苷酶抑制剂阿卡波糖作为阳性对照样品，根据 优化后的抑制活性筛选模型对212株海绵共附生微生物的粗提物样品进行筛选．结果表明：19株 微生物的粗提物抑制率大于50％；其中，抑制活性最高的5株菌株的粗提物，在浓度为0．4、0．6、 0．8mg／cm3时，其抑制活性均在70％以上，远远高于阿卡波糖的最高抑制率58％(1．6mg／cm’)． 其中菌株HY。娟粗提物浓度在0．4mg／cm3时，仍具有很高的仪一葡萄糖苷酶抑制率79．3％．通过16s rDNA序列测定与分析，鉴定该菌株为坚强芽孢杆菌(日oc珊瑚．声rm眦)．坚强芽孢杆菌代谢产物能显 著抑制仅一葡萄糖苷酶活性，这为研制新型d一葡萄糖苷酶抑制剂提供了有力的线索，对坚强芽孢杆 菌有待作进一步的研究． 关键词：海洋微生物学；海绵共附生微生物；仅一葡萄糖苷酶抑制剂；抑制活性；菌株鉴定 N．1000—8160．2012．03．012 DOl：10．3969／J．ISS 中图分类号：P735 文献标识码：A 在广阔的海洋里生存着数以万计的生物，海洋 物质实际上是由海绵共附生的微生物所产生的，每 生物的种类和多样性远远超出陆地生物．由于海洋 年有上百种的新化合物及其新功能被发现和研究， 生态环境的特殊性，使得海洋生物拥有与陆生生物 并且这些活性化合物都被证明与海绵共附生微生物 不同的生理和代谢功能．近几十年，人们通过对海洋 有关[4-5。． 生物的不断探讨，从海洋动植物及微生物中分离鉴 定出上万种天然活性物质。1七J．其中，海绵是最原始 肠粘膜细胞刷状缘上的酶，它对生物体内新陈代谢 的多孔形无脊椎生物，是海洋天然产物的重要来源． 的生化反应起着关键作用．人们从食物中摄取淀粉 近年来，从海绵中分离的结构新颖、药理活性显著的 等多糖，通过体内代谢最终以仪一葡萄糖苷酶的作用 天然产物有萜类、生物碱类、聚醚类、大环内酯类、多 变成葡萄糖，进入血液形成血糖，但血糖过高会增加 肽类等旧J．海绵体内有着非常复杂的微生物生态系 糖尿病的发病率，在研制抗糖尿病的药物过程中，人 统，其共附生微生物群落占海绵干重的40％左右， 们发现仅一葡萄糖苷酶抑制剂具有可逆地占据仅一葡 最高可达，70％．研究发现，从海绵中所获得的活性 萄糖苷酶与糖结合位点的特点，从而能够抑制＆．葡 收稿日期：2012旬1旬4 基金项目：国家自然科学基金资助项目4l006097，4l106113)；教育部科学技术研究重点项目资助项目(2l1065)；江苏省自然科学 基金资助项目(BK2010322)；上海药物研究所新药研究国家重点实验室开放课题资助项目(SIMMl106KF_09)；江苏省教育厅高校 自然