现代生物显微技术的现状与发展趋势.pdfVIP

, 2003,31(2) :243- 245 Journal ofAnhui Agricultural Sciences 1) 2) 1) 1) 2) ( 安徽省立医院口腔科, 合肥230001; 安徽大学生命科学学院) ,。 ,,。 ,,。 。 ;;; Q336 A 0517- 6611(2003)02- 0243- 03 [3] 1 1.3 在电镜(TEM) 1. 1 (Transparent Electron Microscope, 中, 利用特殊的电子束点源照射有一定厚度分布的样品, TEM) 1926年 Busch 发表了关于运动电子在轴对称磁 并使直接入射波(参数波) 和样品的散射波相互干涉形成 中的运动轨迹的实验结果。实验结果表明, 轴对称磁 一种图像, 这就是全息像(hologram) 。把这种显影后的全 可会聚电子束, 且这种电子光学系统服从于几何光学 息底片放到一个光学装置中重现, 即可呈现一幅逼真的 定律。在此基础上,Ruska 等人根据电子光学与光学的相 立体图像。其显微全息成像的原理是根据F.N.Leith 和 似性和光学显微镜的结构研制出了世界上第1台电子显 [4] J.Upatnieks 1965年描述的一种技术 , 即使干涉光的球形 微镜。其与普通光学显微镜的主要区别是:用电子束代 波前的半径在再现时增大, 这样再现时的像就放大了。 替光束, 用电磁透镜代替玻璃透镜。由于使用了波长极 一般记录时用短波长的光, 再现时用长波长的光, 则可放 [1] 短的电子波, 故能获得极高的分辨率 。目前透射电镜 大s倍(s等于再现光与记录光波长之比) 。假如记录时 的分辨率已经达到了0.2nm 的水平。高压高分辨率透射 用X线, 重建时用红外线, 则放大可达 600倍; 如记录时 [2] 电镜已接近0. 1nm 。半个世纪以来, 电镜在生物学、医 用电子束源, 而电子显微镜的电子束波长比可见光波短 学、材料学及其他学科方面有着广泛应用, 尤其在纳米材 十数万倍, 则分辨率可达到5nm(2~ 5nm) 以下。由于其 料的微结构分析及与其他微束分析相配合的技术方面占 方法比较复杂, 故目前未能广泛应用。 有重要的地位, 促进了科学的发展。其发明者Ruska 因此 2 (Scanning ElectronMicrosoope, SEM) 获得1986年Nobel 物理学奖。虽然透射电镜极大地提高 1935年Knoll 就提出利用一个扫描电子束从固定表 了人们对微观世界的观察能力, 但由于高速电子对样品 面获得图像的原理。1965 年实用性的扫描电镜才被推 的穿透能力有限, 故必须制备超薄(几百 ! 到几十 ! ) 的 出。它是利用经磁透镜会聚成的极狭窄的电子束( 称为: 电镜样品, 且难以从电镜上直接得出样品的三维结构。 电子探针electron probe) 去扫描样品, 即电子束在样品上 样品制备过程有时还会带来一些人为的效应, 使观察图 作光栅运动, 电子束与样品交互作用后会发出各种信号, 像失真。特别是生物样品大部分是以碳氢氧为主的轻元 利用从样品表面收集到的信号