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细胞培养和组织化学实验讲义 （研究生用） 组胚教研室 二○一三年三月二十日 目录 第一章 组织培养1 第一节 组织培养的基本概念1 第二节 组织培养实验室的基本条件和设施5 第三节 实验器具及培养器皿的清洗和消毒6 第四节 常用培养液的配置和灭菌7 第二章 组织培养基本操作技术10 第一节 组织培养基本技术要领10 第二节 细胞传代培养和克隆形成率实验10 第三节 细胞计数法12 第四节 细胞观察、冻存、复苏及运输13 第三章 细胞化学概论17 第一节 概 述17 第二节 细胞化学染色标本及其方法、原理18 第三节 细胞化学染色标本制备过程中的注意事项19 第四节 多糖类的染色20 第五节 凋亡细胞的荧光染色形态观察21 第四章 免疫组织化学22 第一节 免疫组织化学中的免疫学原理22 第二节 组织和细胞标本制备23 第三节 免疫组织、细胞化学常用染色方法25 第四节 非特异性染色问题及对照的设置28 细胞培养与组织化学实验报告30 1 第一章 组织培养 第一节 组织培养的基本概念 组织培养（tissue culture ）：是指从机体内取出活细胞、组织在体外模拟的生理环境下， 即无菌、适当营养、温度和pH 等条件下，使之生长并维持结构、功能的方法。组织培养包 括：细胞培养、组织培养和器官培养。在实验室常会统称为细胞培养。 组织培养是现代医学的重要的研究方法和技术，在医学检测、药物生产、医疗上也有 重要的作用。其主要用途有：①药物、食品、环境的检测。②遗传工程、基因工程、生物工 程及基因调控的研究。③病毒检测和培育。④基因工程、生物工程药物的生产。⑤细胞免疫。 ⑥单克隆抗体技术。⑦体外转化、突变的研究。⑦各种化学、物理、生物对细胞的生物学效 应研究。⑧组织工程、不同细胞的相互作用、细胞外环境的研究。⑨多方面的临床的检测等。 因此在医学上有着广泛的用途。 一、组织培养在医学生物学研究中的特点 1.研究对象丰富：可使用种类广泛的细胞、组织、器官。取材可来自高等、低等不同动 物，不同年龄如胚胎、幼体、成年、老年的机体材料。可用正常、病理、肿瘤的标本。可用 已建成的细胞株或原代细胞。 2.观察手段较全面：可进行活体连续观察，可用相差显微镜、荧光显微镜、电子显微镜、 一般光学显微镜等观察，可进行 HE 染色、Giemsa 染色、组织化学染色、免疫组织化学染 色、原位PCR 染色、同位素标记、免疫电镜等观察，可进行细胞的生物化学和分子生物学 及基因分析，可进行细胞的生理活动和其他生命活动的测定。 3.可比性好、可靠性强：一次可培育出大量同种、同一代细胞，各实验组可在同一时间 下进行，可取得同样性质的实验对象，因此重复性好。 4.可实行各种物理、化学、生物等因素对实验对象的直接作用。由于在体外条件下可减 少和控制影响因素，实验结果容易分析。 5.节约资金和人力。 实验结果不能和机体内的结构等同：因为组织培养的条件下缺乏机体的神经、体液、免 疫的调节。缺乏三维生长的条件。缺乏不同细胞之间的相互作用和细胞外基质的影响。组织 培养的条件下环境不够稳定等原因。 二、组织培养细胞生物学 （一）体内、外细胞生物学特性的异同 1.体内细胞的特性：体内细胞在分裂、增殖的过程由于机体的神经、体液、 免疫的调 节和细胞之间的相互作用和细胞外基质及各种细胞因子的影响同时进行着分化。不同的部位 的细胞受到不同基因调控因素的影响，因此表现出不同的形态、结构和功能，有的细胞进入 凋亡。结果形成了不同功能的组织、器官，成为一个完整的机体。 2.体外培养细胞的特性：由于当前细胞培养技术的发展，模拟体内环境的水平有了很大 1 提高，在体外可较好地生长、增殖并能在一定程度上进行分化。但在目前的技术水平还不