杂交中稻广两优476品种与纯度鉴定.docVIP

杂交中稻广两优476品种与纯度的鉴定 摘要：为辨别杂交中稻广两优４７６种子真伪并鉴定其纯度，利用农业部《水稻品种鉴定 dna指纹方法》（ｎｙ／ｔ １４３３—２００７）中推荐的２４对引物进行pcr，使用聚丙烯酰胺凝胶电泳对广两优４７６及其亲本，以及另外几个育种常用亲本材料进行了多态性筛选，并利用筛选所得引物的ssr标记对广两优４７６进行了种子纯度分析。结果表明，这２４对引物在几个常用亲本及广两优４７６间具有良好的多态性，可用于构建广两优４７６的ｄｎａ指纹图谱。同时，从中筛选得到标记ｒｍ２０９和ｒｍ１７的两对引物在广两优４７６父母本间有显著多态性，其中ｒｍ２０９的引物的pcr产物在２％琼脂糖凝胶电泳条件下分辨效果最好，可用于广两优４７６杂交种子的纯度鉴定。２００９年冬在实验室使用ｒｍ２０９鉴定广两优４７６杂交种子纯度，结果为９８．６％，与２０１０年春在海南田间种植鉴定纯度９８．３％相符。 关键词：ｓｓｒ标记；杂交水稻；广两优４７６；品种鉴定；纯度鉴定 the variety and purity indentification of hybrid rice guangliangyou 476 ｄｕ ｘｕｅ－ｓｈｕ，ｑｉ ｈｕａ－ｘｉｏｎｇ，ｘｉａ ｍｉｎｇ－ｙｕａｎ （ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｏｆ ｆｏｏｄ ｃｒｏｐｓ， ｈｕｂｅｉ ａｃａｄｅｍｙ ｏｆ ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ｓｃｉｅｎｃｅｓ，ｗｕｈａｎ ４３００６４，ｃｈｉｎａ） ａｂｓｔｒａｃｔ： ２４ ｓｓｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｒｅｃｏｍｍｅｎｄｅｄ ｂｙ ｃｈｉｎａ ｎａｔｉｏｎａｌ ｒｉｃｅ ｒｅｓｅａｒｃｈ ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ ｗｅｒｅ ｓｃｒｅｅｎｅｄ； ａｎｄ ｔｈｅ ｍａｒｋｅｒｓ ｓｈｏｗｉｎｇ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｍｏｎｇ ｈｙｂｒｉｄ ｒｉｃｅ ｐａｒｅｎｔｓ ｏｆ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６ ａｎｄ ｏｔｈｅｒ ｐｏｐｕｌａｒ ｃｕｌｔｉｖａｒｓ ｗｅｒｅ ｕｓｅｄ ｆｏｒ ｐｕｒｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６ ｓｅｅｄｓ． ｉｔ ｗａｓ ｓｈｏｗｅｄ ｔｈａｔ ｔｈｅ ｓｓｒ ｍａｒｋｅｒｓ ｗｅｒｅ ｗｉｔｈ ｇｒｅａｔ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ｐａｒｅｎｔｓ ａｎｄ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６， ｔｈｕｓ ｗｅｒｅ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｂｕｉｌｄｉｎｇ ｏｆ ｆｉｎｇｅｒｐｒｉｎｔ ｏｆ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６． ２ ｓｓｒ ｍａｒｋｅｒｓ， ｒｍ２０９ ａｎｄ ｒｍ１７， ｗｅｒｅ ｄｅｔｅｃｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｐｏｌｙｍｏｒｐｈｉｓｍ ｂｅｔｗｅｅｎ ｒ４７６ ａｎｄ ｇｕａｎｇｚｈａｎ６３ｓ； ｍｏｒｅｏｖｅｒ， ｂａｎｄｓ ｏｆ ｒｍ２０９ ｗｅｒｅ ｗｅｌｌ ｄｅｐａｒｔｅｄ ｂｙ ２％ ａｇａｒｏｓｅ ｇｅｌ ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ， ｍａｋｉｎｇ ｉｔ ｓｕｉｔａｂｌｅ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｕｒｉｔｙ ｔｅｓｔ ｏｆ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６ ｓｅｅｄｓ． ｔｈｅ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｔｅｓｔｅｄ ｐｕｒｉｔｙ ｏｆ ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６ ｈｙｂｒｉｄ ｓｅｅｄ ｉｎ ｗｉｎｔｅｒ ２００９ ｕｓｉｎｇ ｒｍ２０９ ｗａｓ ９８．６％， which was ｃｏｎｓｉｓｔｅｎｔ ｗｉｔｈ ｔｈｅ ｆｉｌｅｄ ｔｅｓｔｅｄ ｒｅｓｕｌｔ ｉｎ ｈａｉｎａｎ ｓｐｒｉｎｇ ２０１０（９８．３％）． ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ： ｓｓｒ ｍａｒｋｅｒ； ｈｙｂｒｉｄ ｒｉｃｅ； ｇｕａｎｇｌｉａｎｇｙｏｕ ４７６； variety identification； ｐｕｒｉｔｙ ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎ 获得高纯度的水稻杂交种子是充分发挥杂交稻杂种优势潜力的基础。由于在制种过程中往往出现生物混杂、机械混杂等，导致杂交种子的纯度和真实性受到影响，因此在水稻杂交种子销售使用前，需对其纯度和真实性进行鉴定［１］。当前鉴定种子纯度的方法主要是田间形态鉴定法，此外还有种子形态鉴定法、幼苗鉴定法、叶色标记鉴定法、同工酶电泳法、蛋白质电泳法以及近年来逐渐开始应用的水稻ｄｎａ指纹图谱鉴定技术等［２］。上述鉴定方法各有利弊。田间形态鉴定法结果较可靠，但存在鉴定周期长、费用高，受季节限制，且鉴定结果是否可靠与鉴定人员经验丰富与否相关；种子形态鉴定法、幼苗鉴定法、叶色标记鉴定法则受限于检测对象是否具备典型的特异性状，适用范围有限；同工酶电泳法、蛋白质电泳法主要的问题是鉴定结果可靠程度不高；而ｄｎａ指纹图谱技术，主要是指利用包括ｒｆｌｐ、ｒａｐｄ、ａｆｌｐ和ｓｓｒ等分子标记技术，鉴定生物个体间是否存在内在的差异［３］，因而鉴定结