老年性痴呆病人血浆中生物标志物地研究.pdfVIP

可能与其它脑区组成了有关记忆功能的广泛分布的神经网络，它们之间的互动实现了对被记忆 事件的编码加T。有关记忆功能的广泛分靠的神经刚络及其它们之问的互动关系也为利用程序 性记忆改善定向力提供依据。 大脑的这种并脑区Hi但精密分T而且密切合作的关系亦为本研究的结果所证明，但同时运 用这两种方法是台能进一步提高疗效，以及对认知的其他方面是=岔产生影响还有待迸一步的研 究。 4．结论：稗序性记忆训练对重度脑外伤患者定向力的改善有明显效果；与传统治疗方法 相比无明显著异。程序性记忆洲练是划重度脑外伤患者进行定向力治疗的一种有效方法。 老年性痴呆病人血浆中生物标志物的研究 代粹 昆明医学院第一附属医院康复理疗科 由反府性氧化物(ROS)引起的蛋一质氧化修饰是老年性痴呆，也称阿尔茨海默病 (Alzheimer’sdisease．AD)的发摘主要冈素，奉实验通过用二维电泳法分离AD病人血浆和年 龄相对赢的健康对照组的血浆后，并与2,4．硝基酚胼(DNPS)结合，用抗．DNP的抗体做免疫 荧光染色来检测氧化蛋白。用MALDI．质谱法做蛋F1质测序，实验显示这些氧化蛋白是纤维蛋 自原Y链的前身．和al抗胰蛋H酶的fj{『身是同源蛋白。AD病人血浆中的这些特殊氧化蛋白 是2-6倍于健康对照组。这些氧化蛋一质参与AD的病理构成，是AD病人诊断的生物标志物。 关键词：蛋白质氧化，纤维蛋F1原Y链。a1抗胰蛋白酶血浆蛋F1，老年性痴呆，生 物标志物。 山反麻性氧化物(ROS)0I起的氧化损害是一神经系统退变性疾痫老性痴呆AD的主要 发病机制．氧化蛋白质堆积在AD病人脑组织中神经元退变的部似上，实验证实这些相同的氧化 蛋白也发现在AD病人的血浆中，氧化导致蛋白质多肽裂解，交叉连接，氨基酸的侧链被修 饰．最后失去细胞的基本功能，并产生细胞毒性堆积．蛋白质氧化的易感性依赖于蛋冉特殊结 构，氧化敏蛋白质已被认为是潸在的AD诊断的生物标志物，蛀普通的定晕氧化蛋白的方法是 通过检测与DNPH结合的羰基数最。在AD摘脑绸织中，能与DNP结合的氧化蛋一质是AD 病人组织病理学的生物标不物。在实验中，我们已用_维聚丙烯酰胺凝胶电泳检测AD病血 浆中总蛋F1和特殊的氧化蛋F1。并用MACDI．质谱测序这些AD病人血浆中的特殊的氧化蛋F_I 质。 材料和方法 抽取诊断为AD的病人，70，89岁，9例，其中2例尸解确诊为AD，健康无痴呆埘照74- 89岁，9例，血浆10ml。装于EDTA卣空管中，离心15分钟，分高出m浆，取少最分装 并稀释至5mg／m，减于．800下备用。蛋n质浓度用BCA法测定。 取l Gradient)胶条 50ug血浆蛋F|放于PH4．7、1．8ram等电点电泳IPG(immobilizedpH 上。电压24．00v／h电泳后，加DNP使之与氧化蛋白质结合，用Conrad等方法。然后一个 样品_份配埘放入两个9％．I5％SDS．丙烯酰胺梯度凝胶。做_维电泳。一个凝胶用银染法。 X 银染后蛋F=f质显影，用ScanMaker于400400分辩率下成像。 另一个凝胶上的蛋白用电刚迹法转移到PVDF膜上。然后进行免疫荧光染色。I：16，000的 程序(日内瓦Bioinformatics公司)进行定量分析后。再把氧化蛋一从凝胶上消化下来．并 用MACDI质谱法进行蛋白测序。 结果和讨论 为检测AD病人血浆中特殊氧化蛋h的特性，用2维电泳分离AD病人和非AD对照组的 血浆蛋白质。并用免疫染色法探测蛋门质羰基．免疫染色DNP．抗体探测出的氧化蛋白质最 突出的有7个氧化蛋白斑点(编号从a到n)，是Ph4．7—5．5的等电点．45—60KD的分子罱。 这些氧化蛋F1质在AD病人及非AD对照组中都存在。然而AD病人的氧化蛋向质斑点强度明 4B”和 显高于非AD的对照组。例如氧化蛋白斑点“Y”大约增加7倍。斑点“a” “q”高3．4倍。在蛋白质染也的图犁中，检测到总蛋白300多个斑点。但J{有不到20个 斑点是抗DNP抗原免疫染色测到的氧化蛋白，其中7个斑点是被相对氧化得最多的，并且氧