耐β内酰胺类鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药性与其耐药基因研究.pdfVIP

耐p内酰胺类鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类的耐药性 及其耐药基因研究 沈娟 浙江湖州解放军第98医院检验科(313000)黄支密单浩杨伟平杨海燕钦敏莉 无锡市克隆遗传技术研究所糜祖煌秦玲 近年来，鲍曼不动杆菌(Acinetobacterbaumannii) 已成为医院感染的重要病原菌，常导致严重的医院 的PCR检测均为阴性。此60株菌株的详细情况可 感染如肺炎、菌血症、各种创伤伤口及烧伤创面感染 参阅文献。 等，甚至造成医院感染的暴发；该菌多重耐药性极 2．标准菌株：为大肠埃希菌ATCC25922、肺炎克 强，不仅对常用的新型超广谱p内酰胺类抗生素有 很高的耐药率，而且也对氨基糖苷类、喹诺酮类和磺 √钔1CC27853。 胺类高度耐受，令抗菌感染治疗相当困难。国外研 3．药敏试验：共测试22种抗生素，其中20种系 究表明，鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类抗生素耐药主 生物梅里埃公司产品ATB药敏试验条，为微量稀释 要是由于菌株产生各种类型的氨基糖苷类修饰酶 法；而头孢哌酮和头孢哌酮／舒巴坦纸片购自杭州天 (aminoglycoside．modifyingenzymes，AME)如3’一磷酸转 和生物制品有限公司，M．H琼脂购自生物梅里埃公 移酶一Ⅵ[APH(3’)一Ⅵ]、整合子介导的3．乙酰转移酶 司，为纸片扩散法。 ．I[AAC(3)．I]、6’．乙酰转移酶．I[AAC(6’)．I]等 4．PCR扩增DNA模板的制备：采用蛋白酶K 所致，而国内相关的研究尚未见报道。因此加强对 消化法提取模板DNA。 鲍曼不动杆菌AME编码基因的研究，了解基因类型 分布及流行情况显得很有必要。为明确我院耐p内 (37)．Ⅵ的PCR及测序：各型基因的PCR引物及测 酰胺类鲍曼不动杆菌对氨基糖苷类耐药原因，我们 序由无锡市克隆遗传技术研究所提供和进行。根据 对从临床分离的42株产TEM型、18株同时产TEM GenBank中已发布的各型耐药基因序列设计引物， 型和SHV型p内酰胺酶鲍曼不动杆菌进行了药敏具体引物序列及产物长度见表1。 试验，对3种AME的编码基因aac(3)一1[aacCl]、 aac(6’)．I[aacA4]和aph(3’)一Ⅵ[aphA6]进行聚合 表1 3种氨基糖苷类修饰酶基因PCR引物 酶链反应(PCR)检测，并对HZ08号菌株的aac(3)一 序列及产物长度 I基因和HZ24号菌株的aac(6’)．I基因进行DNA 基因名称 引物序列(5’一3’) 产物长度(bp) 序列测定比较分析。 aac(3)．I ACCrACI℃CCAACAlrcAGCC169 A朋崩翻刀劂a伪c7国：eC 材料和方法 aac(6’)．I TATGA踟AAATcGA 394 CCCCCI’ITCI℃GrAcCA 234 1．菌株来源、分布及鉴定：60株试验菌株均分 aph(3’)．ⅥATACAGAGACCACCATACAGT 离自我院2000年7月～20