抗O157%3aH7大肠杆菌外膜蛋白免疫应答特性地研究.pdfVIP

B18抗0157：H7大肠杆菌外膜蛋白免疫应答特性的研究 张燕徐建国 陶晓霞张水振 中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所(102206) 卢思奇 首都医科大学基础医学院(100054) 相：拗_p／。L7‘J 0157H7大肠杆菌是肠出血性大肠杆菌(EHEC)的主要血清型。该菌感染可引起水样腹泻，出血 大肠杆菹感染继发的HUS除对症治疗外，尚无有效的治疗方法，所以有必要进行预防该菌感染疫苗的 研究。 LPS 最近有些学者将研究焦点集中于诱导机体产生抗0157O一特异性多糖的血清Igc抗体，他们认 LPS 为该抗体呵能会对机体产生保护性作用，但结果却不如愿，甚至指出血清中抗0157Is,G抗体有增加 导系统体液免疫应答，但不能阻止病原体在肠粘膜的定居。流行病学研究也表明，因感染获得的抗 0157：tt7大肠杆菌IgG抗体并不能阻断该菌的再次感染。 分泌型lgA(slgA)是粘膜表面分泌物中的主要抗体成分，也是粘膜组织抵抗病原体入侵的第一道 免疫屏障。它除可有效地抑制病原体粘附、定居于粘膜表面，并阻断其穿越上皮进入深层组织外，还能 BALB／c小鼠可增强对该菌再定居的抵抗力，而这和粘膜分泌物中sI醴的存在密切相关，而与血中IgG 无关。因此，设法诱导机体产生19n粘膜免疫应答，使分泌物中产生高滴度的skA抗体即是研制0157： H7大肠杆菌疫苗的关键所在。 素可作为抗EHEC定居疫苗的候选因子。 我们由此得到启示，即以局部粘膜免疫和抑制粘附为主导思路，分离纯化外膜蛋白，将其作为保护 性抗原。用BALB／c小鼠模型评价鼻腔、口腔和皮下三种途径免疫所产生的保护力。并进一步研究OMP 中保护性抗原成分。现将实验结果报告如下。 材料与方法 菌株：实验所用菌株来自中国疾病控制中心传染病控制所微生物室冻存的0157：H7大肠杆菌933国 际标准株。用普通LB培养基37。C传代培养。 心。饲养F无菌环境中，用经c060照射的饲料和无菌水喂饲。 中抽提不溶于去污荆的OMP。采用紫外分光光度计测定蛋白含量。 435t-1外膜蛋白(O．35tc／ta)与15pd CT(2t,g／t_￡1) 佐剂混匀。受试小鼠禁食、水2小时后，经食道灌注o．2rnl 10％碳酸氢钠，以中和胃酸，30分钟后，再 经食道灌iE 混合，机械挤压，充分混匀。每只小鼠皮下注射200m上述混合物。 抗OMP特异性抗体的制备：于末次免疫后的第21天攻毒前随机选取各实验组和对照组小鼠各8 只，分别采集血液，同时分别收集每只小鼠阴道分泌物和粪便以提取sk^，用于ELISA检测抗原特异性 抗体。方法如下：血液，取鼠尾血25汕／只，置于盛有2259l PMSF 一70。C备用。阴道冲洗液，用300出无菌PBS反复冲洗阴道，将冲洗液置于Ep管中，并加100mM (丝氨酸蛋白酶抑制剂)和小牛血清分别至终浓度l％和4％，一70℃备用。粪便提取物，收集小鼠粪 PMSF EDTA和100mbl PBS，制成匀浆，于4℃静置20分钟，加1M 便，称重，按每100mg样品加500ta PMSF，叠氮钠至终浓度 分别至终浓度5