基因组学和蛋白质组学的研究和临床应用——临床酶学展望和标准化.pdfVIP

基因组学和蛋白质组学的研究与临床应用 临床酶学展望与标准化 杨振华 (北京医院) 20世纪50年代前，酶的测定只占生化测定很小一部分，这是由于方法(只能用固定时间 法)和仪器(如Warburg仪)的限制。当时临床实验室只测一些水解酶，如淀粉酶(AMY)、脂肪 酶(LPS)、硷性磷酸酶(ALP)和酸性磷酸酶(ACP)。 50年代建立了用分光光度法(340nm)钡JJ酶活性浓度的连续监测法(动态法)。开始测定多 种脱氢酶。如测定乳酸脱氲酶(LD)用于诊断AMI。并在测定脱氢酶方法基础上发展了酶偶 联法，扩大了测定酶的种类，如测定各种转移酶等。其中应用最广的是丙氨酸氨基转移酶 (ALT)和门冬氨酸氨基转移酶(AST)。是目前诊断肝、胆疾病不可缺少的检测项目。肌酸激酶 (CK)彻IJ定更是诊断急性心肌梗死(AMI)的重要依据。 60．70年代，科学家尝试测定各种酶的同工酶来提高诊断效率(特异性、灵敏性)。如LD 同工酶的测定有助于心，肝，骨骼肌和溶血疾病的鉴别诊断。CK．MB同工酶成为当时诊断 AMI的金标准。在我国学会制定的肝癌诊断标准中还将肝癌特异r-谷氨酰基转移酶(GOT) 同工酶列为诊断依据之一。 CK．MB2／CK．MBI的比值成为诊断AMI既特异又是早期的诊断指标。还成功地用免疫法测 定酶／同工酶的质量(mass)方法。测CK．MB的单克隆抗体免疫法目前正逐步取代免疫抑制测 活性测定法。目前开始有学者用分子生物学的方法测体液中酶的mRNA等。这些新技术的 使用往往给人以一种错觉，似乎经典的测酶活性方法，或者说用化学分析仪测酶的连续监测 法己走到了尽头。实际上并非如此，在新的2l世纪中，至少在酶活性测定的标准化和新的 酶测定方面，仍有大量工作要做。 酶活性测定方法的标准化 由于酶活性测定的迅速发展，它在临床化学中占有重要的地位，约占临床化学部f-JN定 总量的l缮到l／3。但在过去，酶的测定结果往往非常混乱。同一标本，不同实验室的数字 结果相差很大。这是因为体液中酶浓度很低，过去必须采用间接测酶活性而不是直接测酶质 量的方法。酶具有很强的催化活性，极小量的酶可以大大加快反应速度(V)。当时科学家虽 无法测定如此少量的酶蛋白，但可以测定其催化反应的速度(v=p／t或一s／t)。在一定条件下从 反应速度的快慢，间接推算出酶浓度的高低。正是由于这些特殊问题和困难，导致在一个相 当时期内酶测定结果非常混乱，给临床和患者带来困惑。例如上世纪七十年代，同是丙氨酸 氨基转移酶(ALT)的正常值，我国南方常以40单位为正常上限，北方的正常上限却是200 单位。在同一城市测定硷性磷酸酶(ALP)，有的医院以高过3单位为异常，而另一些医院却 以超过13单位为异常。 产生这些困惑的根本原因是没作好标准化。首先是单位定义不一致。前面说过，由于使 用的不是直接测酶质量方法，无法使用人们熟悉的质量单位如mg等。而使用冠以各种名称 的所谓的单位，如金氏单位、卡门氏单位等。但不论冠以什么名称，实际上都是表示催化反 应的速度。即在单位时间内，酶反应产物生成量(p／t)，或酶反应底物消耗量(一s／0。这些生成 量或消耗量，作者既可以质量表示，也可以分子量(如um01)等表示。时间的表示则差异更大： 小时、分或秒。前面还可冠以不同数字，如30分、15分、．5分或1分等。为解决此问题， 上世纪六十年代初，世界生化大会将单位统一定义为：每分钟能转化Iumol反应物质的酶量 为一个单位，当时又称为酶的国际单位(InternationalUnit，IU)。只是后来人们认识到只统一 单位，并不能使不同实验室结果一致，故废弃了Iu前面的I，只保留U。当表示溶液中酶 浓度时习惯用U／L。到七十年代国际引入SI制，由此衍生出SI系统的酶单位Katal。通过激 烈的争论，最终IFCC中的酶学委员会不得不接受Katak的规定。但在实际工作中，目前全 世界只有少数国家、少数实验室使用Katal。绝大多数仍使用U或U／L。应该说这种使用方 法并不违背我国计量法要求，因为umol，rain和L都是国家法定衍生单位。 70年代IFCC成立了由著名学者Moss等组成的酶学委员会，他们开始将酶学的标准化 寄希望于制定参考方法上。他们首先明确和界定了测酶活性(酶促反应)的各种条件。这是因 为酶促反应速度的快慢不