家蚕核型多角体病毒遍在蛋白与结合肽的研究.pdfVIP

家蚕核型多角体病毒遍在蛋白及结合肽的研究 张文渡12秫蓉1强壤溉：+吴祥南3 浙江太学1，杭州310329； 激江瑗工大学生物化学硬究所2，杭州310018； 中国科举院上海生化与细胞研究所3，上海200031 nuclear virus mori Zhenjiangstrain， 摘要从家蚕孩型多角{奉癍毒镇江j}：：：(Bombyx polyhedrosis 白保守的Gly—Gly后多出由一个氢基酸组成的延伸肽。原核诱导表达表明BmVUB主要以可 溶性形式存在，表达量占总蓠簧自懿50％以上。统纯的逮在蛋自浓度兔1．03—2．46mg／ml， x10巧以上。用噍菌体表面展示技术筛选遍在蛋白的结合肽，所筛选 制备抗体，效价在3．2 的结台肽可与遍在豢白特异性结合，其中结台肽Ⅵ妲HHAYA孙积T对细胞增殖菊明显的浓 度调控锋用，即{暴滚囊促进缁胞生长，赢浓度强熟抑制缅脆豹生长。 关键词家蚕核型多角体病毒，遍在蛋白，噬菌体肽库，结合肽 学科分类号Q76 pathway，UPP)是目前已知最重要的、 多敦…。逯在蛋白．蛋吕酶体逸径(Ubiquitin．proteasome 有高度选择性的蛋岛质降解途径。遍在鬣自通过结合在不同的蛋自质上，来调节蛋白质的折 叠、降懈及定位，参与多种重要细胞生物学过程的调控12弓J。除此之外，遍在蛋白还与DNA 穆复、细胞周甥调羧、信号转导、基因转录等细腿基本生理过程有关。近年研究发现，遍在 蛋白还与机体的免疫反应、核糖体生物合成、应激反应、神经系统发育、肿瘤、棒经系统疾 病(如帕垒森氏病等)、基因的开启关闭及转录因子活化等有着相当密切的关系旧J。 已翻爱虫病毒魏少数缨藏中存在编码遗在蛋爨或遍在蛋自样蛋白豹基墨．编码的遍在蛋 白或近在蛋白样蛋国，在其感染和致病过程中起关键作用}，，j。移码突变实验表明，苜蓿银纹 Nuclear 夜蛾核型多角体瘸毒(AutographacalifomicaMulticapsid virus， polyhedrosis AcMNPV)编码懿UB蛋自是一释j#必需蛋自，与辑状病番感染及瘸毒．宿主的裰互作用剪 关淄l。目前对昆虫杆状病毒遍在蛋白的研究还不多，其作用也无确凿证据，昆虫杆状病毒编 码的遍在蛋白与其宿主的遍在蛋白一蛋白酶体系统之间的相互关系至今仍不清楚，而 BrmNpV懿逯在蛋良在病毒复龋程感染过程中所起的终耀还来见梧美报道。本文缝诧了家蚕 核型多角体病毒遍在蛋白的原核表达产物(BmⅥJBJ，从噬菌体肽库中筛选结合肽，测定结 台肽的活性。现将结果报告如下。 l材料筠方法 I．I材料 壶浙江瑗王大学生物纯学研究所保存，噬菌体十二肢痒(豫。D。．1 2滋PhageDisplaypeptide ‘通讯联系入． 390 library， nl： ENLAND CCCTCATAGTTAG-CGTAACG)均购自NEW BIOLAB公司，兔抗M13噬菌体培G 抗体(1：2500)购自Sigma公司，羊抗兔二抗购自上海晶美公司，新西兰大白兔(2．5埏， 雄性)购自浙江大学医学院实验动物中心。 1．2方法 1．2．1 BmNPV-ZJ株基因组DNA的提取、克隆、分析及表达 基因(NCBI)的相应序列，设计--x捐l物如下，PI：5’-C