3实验二细菌的简单染色.pptVIP

实验二 细菌的简单染色及革兰氏染色 实验目的 1、掌握细菌染色的原理 2、掌握细菌简单染色和革兰氏方法 实验原理---单染色 1、用于生物染色的染料的碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。酸性染料的离子带负电荷，能与带正电荷的物质结合。 2、因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。当细菌分解糖类产酸使培养基pH下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 实验原理---革兰氏染色 该染色法能将细菌分为G+菌和G-菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。 G-菌的细胞壁中含有较多易被乙醇溶解的类脂质，而且肽聚糖层较薄、交联度低，故用乙醇脱色时溶解了类脂质，增加了细胞壁的通透性，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经蕃红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔径缩小，通透性降低，因此细菌仍保留初染时的颜色。 实验器材 1、材料 大肠杆菌；金黄色葡萄球菌;枯草芽孢杆菌 2、试剂或染液 复红染液；草酸铵结晶紫；碘液；95%乙醇；番红溶液； 蒸馏水 3、其他 载玻片；接种环；酒精灯；打火机；卫生纸；酒精棉球 实验步骤 1、简单染色： （1）涂片： （2）晾干：让涂片自然晾干或者在酒精灯火焰上方文火烘干。 （3）固定：手执玻片一端，让菌膜朝上，通过火焰2-3次固定（以 不烫手为宜） （4）染色：将固定过的涂片，加复红染色2~5min。 （5）水洗：用水洗去涂片上的染色液 （6）干燥：将洗过的涂片放在空气中晾干或用吸水纸吸干。 （7）镜检：先低倍观察，再高倍观察，并找出适当的视野后，将高倍镜转出，在涂片上加香柏油一滴，将油镜头浸入油滴中仔细调焦观察细菌的形态。 实验步骤 2、革兰氏染色： 实验作业 绘出金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌的形态图，并注明两菌的革兰氏染色的反应性 * * 革兰氏阴性杆菌 革兰氏阳性杆菌 制片→初染（结晶紫1min）→水洗→媒染（碘液1min）→水洗→脱色（乙醇20-30s）→水洗→复染（复红2min）→水洗→干燥→观察 *